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IlaSab
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 21 gennaio 2009 : 17:08:58
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Ciao, qui abbiamo un problema con lo sviluppo del western blot, ovvero non si vedono le bande, ma non si vedono neanche i contorni della nitro, il nostro dubbio è: lo sviluppo è avvenuto e quindi il problema riguarda anticorpi o altro?!o non si è proprio sviluppato? Premessa: La corsa è venuta bene, il blotting anche, almeno apparentemente.
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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 17:21:46
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quindi al rosso ponceau le bande sono visibili?
in tal caso allora il problema sta nello sviluppo, anche io sto avendo lo stresso problema in questi giorni, stamane ho anche provato a cambiare i liquidi di sviluppo 1 e 2 ma nulla. |
non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono. |
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IlaSab
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 17:25:31
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| Non si fa il rosso ponceau... |
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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 17:26:55
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| dopo il trasferimento non fai rosso ponceau? |
non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono. |
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IlaSab
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 17:29:23
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| No! |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 21 gennaio 2009 : 19:12:03
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Gli anticorpi sono corretti? Stai riusando aliquote vecchie?
Il marker lo vedi sulla nitrocellulosa?
PS: il rosso ponceau non è indispensabile (io non lo facevo mai) pero' in questi casi forse è una buona idea farlo giusto per mettersi l'animo in pace |
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nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
Inserito il - 22 gennaio 2009 : 10:50:08
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| beh..secondo me il rosso ponceau è sempre utile..tanto ci vogliono 5 minuti per la colorazione..almeno ti togli il dubbio del trasferimento..per lo sviluppo io torno a ribadire le bizze dell'ecl.. |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa... |
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mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato
116 Messaggi |
Inserito il - 22 gennaio 2009 : 11:43:41
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qui lo dico e qui lo ripeto. X sapere se il vostro liquido di sviluppo non funziona prendete la lastra e mettetela al sole. poi sviluppate. se vi deventa nera come il carbone il liquido funziona e probabilmente il vostro ECL no. in quest ultimo caso provate a esporre la lastra per piu tempo. in ogni caso esistono degli ECL ad altissima potenza in cui bastano pochissimi secondi di esposizione. visitate il sito della Pierce
Riguardo al rosso ponceau io lo farei sempre. almeno vedete se ci sono delle bolle proprio dove cade la vostra banda e vi risparmiate i passaggi successivi...
Ciao |
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Biotecgen
Utente Junior
Città: Napoli
191 Messaggi |
Inserito il - 22 gennaio 2009 : 12:23:55
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infatti, come dice Mattia potrebbero essersi formate delle bolle all'altezza della tua proteina e con il rosso ponceau puoi vedere se è avvenuto ciò. Poi non ti ruba tantissimo tempo.
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non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono. |
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Sviluppo Western blot
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