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1969rc
Nuovo Arrivato

10 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2009 : 11:15:28

Ciao

mi rivolgo a voi per capire se qualcuno mi può aiutare. Il mio problema è questo: devo fare dei western blot per una proteina il cui acronimo è PARP e non so molto nè della proteina, ma questo è un problema che posso risolvere velocemente, nè di western blot.
Magari tra di voi c'è qualcuno che lavora su questa proteina e fa dei western e gli/le sarei molto grato se mi desse qualche dritta su questa tecnica applicata a questa proteina, sopratutto per quanto riguarda la preparazione del campione, i vari gel da preparare e tamponi, in sintesi ogni consiglio è ben accetto.
Premetto che la mia proteina è stata estratta da tessuto tumorale di ratto.

Grazie

mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato

116 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2009 : 16:00:57

Mah io direi che il WB è uguale per tutte le proteine, cambia solo l'anticorpo primario che usi per legarle. Per sapere di piu sul WB dovresti trovare qualcosa su questo sito. Prova a cercare.
In merito alla preparazione del campione dipende molto dove si trova la proteina (nucleo, citosol, membrane...) e cosa determina la tua condizione speriemetale (solo un cambiamento di espressione o anche una migrazione da un comparto cellulare all'altro)? Quando saprai di piu della tua proteina e cosa gli succede durante la tua condizione sperimentale sceglierai il metodo migliore per preparare il campione.
spero di esserti stato utile

1969rc
Nuovo Arrivato

10 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2009 : 18:16:44

Certo! Ripeto qualsiasi dritta è ben accetta

chick80
Moderatore

Città: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 26 gennaio 2009 : 19:33:21

Cerca in letteratura se qualcuno ha già fatto WB per quella proteina, soprattutto per vedere che anticorpi hanno usato. Poi per l'ottimizzazione del tutto devi andare un po' empiricamente...

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