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Autore Discussione  

jeje
Nuovo Arrivato



52 Messaggi
Inserito il - 04 febbraio 2009 : 12:43:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di jeje Invia a jeje un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao a tutti ,sto facendo western per andare a valutare alcune proteine di segnale.
nonostante abbia usato un buffer di lisi con PMSF e cocktail di inibitori e abbia lavorato in ogni step in ghiaccio (la corsa elettroforetica nn l'ho fatta a 4°C), la proteina risultava degradata...
qualche suggerimento?

jeje
Nuovo Arrivato



52 Messaggi
Inserito il - 05 febbraio 2009 : 15:58:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di jeje Invia a jeje un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ma perche a me non risponde nessuno....
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 05 febbraio 2009 : 16:21:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Proteine normali o fosforilate?

Io usavo questo cocktail di inibitori:
http://www.molecularlab.it/protocolli/reagent.asp?name=Cocktail%20di%20inibitori%20delle%20proteasi
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jeje
Nuovo Arrivato



52 Messaggi
Inserito il - 05 febbraio 2009 : 17:35:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di jeje Invia a jeje un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si ala forma fosforilata che quella non..ma sono tutte degradate..
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Ricciola
Nuovo Arrivato



38 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2009 : 15:39:50  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ricciola Invia a Ricciola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao,
io ti consiglio di non mettere più di 5microlitri di sample buffer per pozzetto.
fammi sapere!
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mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato



116 Messaggi
Inserito il - 06 febbraio 2009 : 16:30:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mattia.dinunzio Invia a mattia.dinunzio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
cosa intendi per degradata???
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jeje
Nuovo Arrivato



52 Messaggi
Inserito il - 09 febbraio 2009 : 13:20:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di jeje Invia a jeje un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
intendo che è rotta in tre frammenti...
X ricciola: come mai devo stare bassa nel volume?
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