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Ricciola
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38 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2009 : 15:51:01  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ricciola Invia a Ricciola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao,
prima il western mi veniva sempre, ora ho un problema con la corsa elettroforetica.
Il "sintomo" è che durante la corsa il marker mi scompare sotto gli occhi mentro corro (non sono udinì).
Quando blotto il marker mi si trasferisce a "strisciate" anziché trattini ben definiti e lo sviluppo...bé, è un disastro.

aldilà del rosso ponceau mi sapete dare qualche dritta risolutiva?

Pensavo di aver risolto facendo una madre per il tampone di corsa nuovo, invece....



Ricciola

Biotecgen
Utente Junior

Città: Napoli


191 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2009 : 16:58:09  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biotecgen Invia a Biotecgen un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
prova a cambiare il generarote

non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono.
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Ricciola
Nuovo Arrivato



38 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2009 : 17:38:11  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ricciola Invia a Ricciola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
domani ci provo....tanto le sto provando tutte!
poi ti faccio sapere
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 09 febbraio 2009 : 17:40:33  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Controlla anche il pH di tutte le soluzioni, non solo il tampone di corsa, ma anche quelli del gel!
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Ricciola
Nuovo Arrivato



38 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2009 : 09:16:06  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ricciola Invia a Ricciola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
grazie GFPina, ho già controllato tutti i pH e sono tutti ok, come pure il marker (ho iniziato quello nuovo).

Oggi farò una prova con gel a % diversa e con alimentatori diversi...vi tengo aggiornati!
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Ricciola
Nuovo Arrivato



38 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2009 : 12:53:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ricciola Invia a Ricciola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
nada, non è né l'alimentatore né l'apparecchio elettroforetico.

A questo punto non mi rimane che buttare via tutto e rifare/cambiare tutto...mi sono pure fatta prestare dell'acqua distillata dall'esterno....

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Utente Junior



565 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2009 : 13:02:15  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di là Invia a là un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
magari è il marcatore che si è "guastato". una volta una ragazza qui da me per sbaglio lo ha fatto bollire insieme ai campioni, e poi non correva più,o se correva lo faceva malissimo, un po' come è successo a te.
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Biotecgen
Utente Junior

Città: Napoli


191 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2009 : 13:31:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biotecgen Invia a Biotecgen un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si sicuramente nel marcatore c'è qualcosa che non va, ma come si spiegherebbe poi che lo sviluppo è un disastro ??
ho capito che non ti piace fare il rosso ponceau ma secondo me ti sarebbe utile xchè se non vedi le bande col ponceau io sarei orientato a pensare che il problema non sta nemmeno nel marcatore ma nei reagenti che usi per fare il gel.

non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono.
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Ricciola
Nuovo Arrivato



38 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2009 : 16:09:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ricciola Invia a Ricciola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao,
non penso che il problema sia il marker, anche perché l'ho cambiato e uso il mio e quello di altro team insieme e non cambia niente...
il marker è l'indicatore che la corsa non va....
boooooooooooooooo

grazie a tutti per le risposte comunque!
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mattia.dinunzio
Nuovo Arrivato



116 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2009 : 16:29:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di mattia.dinunzio Invia a mattia.dinunzio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ti direi di mandare una mail a Dr House...
in ogni caso piu faccio sto lavoro e piu mi accorgo che ce ne sono di cose inspiegabili...
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Biotecgen
Utente Junior

Città: Napoli


191 Messaggi

Inserito il - 10 febbraio 2009 : 18:42:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Biotecgen Invia a Biotecgen un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
a me per due settimane nel mese di Gennaio nel fare i Western me ne sono capitate di tutti i colori, mi sono fatto una cultura impressionante, posso dire che sono quasi esperto di Western
Ad ogni modo sono inconvenienti che ti fanno fare esperienza e crescere, basta farne tesoro

non esistono domande indiscrete...le risposte a volte lo sono.
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Ricciola
Nuovo Arrivato



38 Messaggi

Inserito il - 11 febbraio 2009 : 13:06:52  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ricciola Invia a Ricciola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Biotecgen: "modestie" a parte, sono sicura di essere l'unica che si può "vantare" del marker che sparisce...probabilmente sono un X-girl e più che a Dr House devo scrivere a Fox Mulder
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nyo84
Utente Junior


Prov.: Brescia
Città: Piancogno


239 Messaggi

Inserito il - 12 febbraio 2009 : 16:54:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di nyo84 Invia a nyo84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
i gel li fai tu?i reattivi sono magari scaduti?o sono stati per sbaglio conservati male?

Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa...
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Ricciola
Nuovo Arrivato



38 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2009 : 15:46:10  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ricciola Invia a Ricciola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
sì sì faccio tutto io; il temed l'ho cambiato, perché era finito, e non cambia nulla, la prossima prova cambierò anche l'APS, a forza di prove è finito pure quello
cmq la polimerizzazione mi sembra ok, ma ormai non mi resto molto altro da cambiare...
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Aureus
Utente Junior

0613_da_Fil23

Prov.: Forlì-Cesena
Città: Gambettola


123 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2009 : 16:14:38  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Aureus  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Aureus Invia a Aureus un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Secondo me il problema è nella composizione del Gel di Poliacrilammide..
...stai attenta alle composizioni del temed e APS
...lascialo polimerizzare alla luce
Io di solito uso un 8% e ne faccio 10 ml:
-H2O 4.6 ml
- 30% acrilammide 2.7 ml
-1.5 M Tris ph 8.8 2.5 ml
-10% SDS 0.1 ml
-10% AMMONIO PERSOLFATO (APS) 0.1 ml
-TEMED 0.006 ml

Buonafortuna!
p.s.
Puoi pubblicare una foto della tua "strisciata" di Gel dopo colorazione?


www.tlbspazio.it

Tecnici di Laboratorio Biomedico
Lorenzo Nardi
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Ricciola
Nuovo Arrivato



38 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2009 : 17:39:26  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ricciola Invia a Ricciola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao Aureus,
grazie per il tuo messaggio; qualunque sia il problema, è davvero strano che prima andava bene ed ora non più...
per la rabbia ho già buttato via tutti i blot con la "strisciata di marker" che mi veniva dopo il trasferimento, se mi risuccede pubblico la foto, ma spero che non risucceda ehehe
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dabar
Nuovo Arrivato


Prov.: Catania
Città: Catania


30 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2009 : 19:08:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di dabar  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di dabar Invia a dabar un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao Ricciola,
ma tu usi acrilammide e N,N'-metilen-bis-acrilammide come polveri separate e poi le misceli? E se è così in che rapporto stanno le due?...potrebbe trattarsi che qualcuna delle due polveri è scaduta.
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dabar
Nuovo Arrivato


Prov.: Catania
Città: Catania


30 Messaggi

Inserito il - 13 febbraio 2009 : 19:10:18  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di dabar  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di dabar Invia a dabar un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
...PS:..dimenticavo. Dopo aver fatto sciogliere in H2O pH la soluzione...e se si a che pH deve essere secondo il tuo protocollo?
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Ricciola
Nuovo Arrivato



38 Messaggi

Inserito il - 20 febbraio 2009 : 14:37:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ricciola Invia a Ricciola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
HO RISOLTOOOOOOOOOOOO!!!!!!!!!!!!!!!!!!

ragazzi, era una cosa a cui nessuno di noi, io per prima, ha pensato, ed ora che so cos'era mi sembra ridicolo non averci pensato prima:

SDS!!!!!!!!!!!!!!
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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8408 Messaggi

Inserito il - 20 febbraio 2009 : 15:42:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Scusa ma per curiosità, esattamente cosa era successo all'SDS?
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Ricciola
Nuovo Arrivato



38 Messaggi

Inserito il - 23 febbraio 2009 : 10:32:24  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Ricciola Invia a Ricciola un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
francamente, non lo so, ho 2 ipotesi:

A) è stato inquinato

B) è precipitato perché la madre del running la tengo in frigo ed ho iniziato ad avere problemi in contemporanea con l'abbassamento delle temperature (il riscaldamento è quello che è...)
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