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Inserito il - 13 febbraio 2009 : 19:20:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di dabar  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di dabar Invia a dabar un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Ciao a tutti,
l'altro giorno ho effettuato un'estrazione di proteine da un pellet di circa 5 milioni di cellule.Il problema č che alla lettura il campione č venuto troppo diluito (neppure 1 ug/ul). Qualcuno sa suggerirmi un protocollo per poter fare riprecipitare le proteine e concentrarle quindi ridsciogliendole in un volume minore di RIPA ed inibitori di proteasi?
Grazie mille.
Ciao

chick80
Moderatore

DNA

Cittā: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 13 febbraio 2009 : 20:02:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Puoi riprecipitarle con TCA e acetone

http://labs.fhcrc.org/hahn/Methods/biochem_meth/tca_ppt.html
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30 Messaggi
Inserito il - 15 febbraio 2009 : 18:52:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di dabar  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di dabar Invia a dabar un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie mille chick80...ma senti io stimo di avere circa 40 ug totali (in un volume di circa 400 ul) DI LISATO PROTEICO. Devo usare il carrier insulinico lo stesso?
Fammi sapereA presto.
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chick80
Moderatore

DNA

Cittā: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 15 febbraio 2009 : 20:11:54  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Hmmm... il protocollo dice di usarlo quando hai pochi microgrammi. Sinceramente non l'ho mai fatto, secondo ma potresti evitare.
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