| Autore |
Discussione |
|
|
Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
 Inserito il - 19 marzo 2009 : 09:51:51
|
ciao amici,
volevo confrontarmi con voi su come preparate le proteine per la corsa elettroforetica per il western blot.
Mi spiego meglio: io per un pozzetto (25 microlitri) preparo una mix con tot microlitri di proteina, sempre 5 microlitri di sample buffer e poi arrivo a volume col buffer di lisi con cui ho estratto le proteine.
L'ultima volta non mi è venuto lo sviluppo (sembrava mi fossi dimenticata Ab ma non è così) e durante la corsa ho notato un lieve "rallentamento" nei pozzetti dove avevo caricato più buffer di lisi.
Eppure l'actina è venuta....
Perciò mi volevo confrontare con voi....grazie!!!
|
|
|
|
|
nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
 Inserito il - 19 marzo 2009 : 10:17:28
|
| ciao..beh..il sample buffer penso sia il Loading Buffer,giusto?e ne usi 5 microlitri perchè presumo sia una soluzione 5X..io per arrivare a volume sinceramente uso acqua distillata con aggiunta di inibitori di proetasi e fosfatasi all'1%.. |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa... |
 |
|
|
Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 19 marzo 2009 : 10:31:58
|
nyo hai ragione, non sono stata precisa.
cmq direi che ci siamo, nel senso che nel mio buffer di lisi c'è il detergente + inibitori proteasi e fosfatasi
ora ho l'ansia finché non sviluppo ufffffff |
|
|
|
nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
Inserito il - 19 marzo 2009 : 11:16:23
|
| beh..il detergente secondo me puoò influire sulla corsa però... |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa... |
|
|
|
Ricciola
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 19 marzo 2009 : 11:52:17
|
però prima d'ora non l'aveva mai fatto
|
|
|
|
nyo84
Utente Junior
Prov.: Brescia
Città: Piancogno
239 Messaggi |
Inserito il - 19 marzo 2009 : 12:27:35
|
| beh..se hai aumentato le quantità,penso che una causa possa essere quella...poi magari parto da un presupposto sbagliato io... |
Fai attenzione quando leggi libri di medicina..potresti morire per un
errore di stampa... |
|
|
| |
Discussione |
|
Preparazione proteine per western blot
Didattica e Relazioni
