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karenina
Utente Junior
131 Messaggi |
 Inserito il - 04 aprile 2009 : 21:34:29
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ciao ho bisogno di aiuto.
in una quantificazione di rna per fare una real time..devo farmi una retta di taratura giusto?
allora come devo regolarmi su quanti punti fare la retta ? COME FACCIO a regolarmi per sapere a qaunto devo diluire il mio rna?
e poi per avere la concentrazione finale posso semplicemente usare la costante di proporzionalità ? ma poi la cosatnte di proporzionalità la devo ottenere dalla media delle costanti di tutti i punti?     
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chick80
Moderatore
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 05 aprile 2009 : 09:54:07
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 di solito l'RNA si legge allo spettrofotometro! |
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karenina
Utente Junior
131 Messaggi |
Inserito il - 05 aprile 2009 : 11:33:33
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| si ok lo so che si legge allo spettrofotometro... ma scusa non si usa la legge lambert beer? non si fa la retta di regressione? |
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karenina
Utente Junior
131 Messaggi |
Inserito il - 05 aprile 2009 : 11:36:08
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| ah no vabbè sucsate mi sono confusa con i nomi... bradford è per le proteine intendevo...lambert beer |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 05 aprile 2009 : 12:12:57
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Semplicemente lo leggi allo spettrofotometro e dal valore di densità ottica ottenuto mediante la legge di Lambert-Beer ricavi la concentrazione. Non serve fare nessuna retta.
Guarda ad es qua: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=3199
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karenina
Utente Junior
131 Messaggi |
Inserito il - 05 aprile 2009 : 12:57:09
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| ah si?' non serve insomma tarare lo strumento.. boh vabbèm aperchè si usa 40 per rna' e che diluizione devo usare? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 05 aprile 2009 : 13:37:44
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Citazione:
Messaggio inserito da karenina
ah si?' non serve insomma tarare lo strumento..
La taratura dello strimento si fa leggendo prima il "bianco", cioè la soluzione in cui è diluito il tuo campione.
Poi bisogns vedere che spettrofotometro hai, se azzera automaticamente l'assordamza dopo avel letto il bianco e se invece devi segnarti il valore e sottrarlo da quello del tuo campione.
Qua trovi una discussione in proposito: quantificazione mediante spettrofotometro
Citazione:
perchè si usa 40 per rna
E' il coefficiente di estinzione molare medio per l'RNA, sono valori calcolati sperimentalmente!
1A260 = 40 µg/ml RNA
Citazione:
che diluizione devo usare
dipende da quanto è grande la tua cuvetta e da quanto è concentrato il campione, io in genere uso 1:100 - 1:50 ho delle cuette dove posso mettere anche solo 50ul, quindi spreco solo 1ul di campione.
Ma anche di questo si parla nella discussione che ti ho indicato.
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angemore
Nuovo Arrivato
82 Messaggi |
Inserito il - 05 aprile 2009 : 14:21:44
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Mi raccomando...usa cuvette al quarzo quando leggi gli acidi nucleici... |
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chick80
Moderatore
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GFPina
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bradford
Didattica e Relazioni
