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89vale89
Nuovo Arrivato
11 Messaggi |
 Inserito il - 23 maggio 2009 : 20:09:54
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Non riesco a capire la parte finale di questo problema:
In pratica bisogna preparare 60 ml di terreno DMEM al 20%,quindi sono 54 ml di terreno al 10% FCS e poi 6 ml di FCS puro.Poi devo piastrare a diverse concentrazioni 6 piastre da 96 pozzetti ciascuna.2 di esse devono avere 1000 cellule/pozzetto,altre 2 devono avere 3000 cellule/pozzetto e le restanti 5000 cellule/pozzetto, partendo da una soluzione madre contenente 10^6 cellule/ml.
Calcolo il numero di cellule totali per la prima concentrazione 1000 cell/pozzetto facendo 1000 cellule x 100 pozzetti (ne preparo una quantità abbondante) x 2 piastre=2x 10^5 cell totali.Lo stesso calcolo lo faccio x la seconda conc 3000 cell/pozzetto =6x10^5 cell totali..Terza concentrazione (5000 cell/pozz)= 10^6 cellule totali.Ora calcolo il volume di soluzione madre necessaria x la prima concentrazione-->10^6:1000 (soluzione madre) = 2x10^5:X --> X=200 microlitri. Seconda conc = 600 microlitri e la terza 1 ml.
Per ogni 2 piastre sono necessari 20 ml di terreno.Fino a qua tutto chiaro.In questi 20 ml devo mettere i 200 microlitri oppure devo togliere dal volume del terreno i 200 microlitri??
Quindi sarebbero 200 microl. in 20 ml,poi 600 microl. in 20 ml e 1ml in 20 ml??
xk nella soluzione all'ultima conc mi dice 1 ml e 19 ml di terreno... AIUTOOOOOO!! GRAZIE IN ANTICIPO!!
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 24 maggio 2009 : 00:03:30
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Beh i conti iniziali del terreno non li ho guardati, ma visto che erano già stati discussi qua:
http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=13195
penso siano giusti.
Passiamo alle cellule:
Citazione:
Messaggio inserito da 89vale89
....Ora calcolo il volume di soluzione madre necessaria x la prima concentrazione-->10^6:1000 (soluzione madre) = 2x10^5:X --> X=200 microlitri. Seconda conc = 600 microlitri e la terza 1 ml.
Per ogni 2 piastre sono necessari 20 ml di terreno.Fino a qua tutto chiaro.In questi 20 ml devo mettere i 200 microlitri oppure devo togliere dal volume del terreno i 200 microlitri??
Quindi sarebbero 200 microl. in 20 ml,poi 600 microl. in 20 ml e 1ml in 20 ml??
xk nella soluzione all'ultima conc mi dice 1 ml e 19 ml di terreno... AIUTOOOOOO!! GRAZIE IN ANTICIPO!!
In teoria dovresti togliere al terreno quello che aggiungi con le cellule, quindi:
1° concentrazione: 200ul di cellule 10^6 + 19,8 ml di terreno (totale 20ml)
2° concentrazione: 600ul di cellule 10^6 + 19,4 ml di terreno (totale 20ml)
3° concentrazione: 1ml di cellule 10^6 + 19 ml di terreno (totale 20ml)
diciamo che mentre per la prima non cambia molto se invece ne metti 200ul più 20ml (l'errore non è molto), per le altre inizia ad essere differente!
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JULIO
Nuovo Arrivato
83 Messaggi |
Inserito il - 28 maggio 2009 : 00:34:03
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Qualcuno m potrebbe dare una spiegazione scientifica sul perchè ho coltivato mioblasti su una piccola petri in vetro ma dopo un po di giorni dal differenziamento in miotubi le cellule iniziavano a staccarsi. Per caso dovevo trattare la superficie con fibronectina,polilisina..etc.?
Qualcuno m potrebbe dare una risp...grazie mille |
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