PCR ALLELE SPECIFICA (ARMS test) come si fa??

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miniprep
Nuovo Arrivato

8 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2009 : 16:26:40

qualcuno saprebbe spiegarmi come si fa questa pcr??
nell'ambito di test genetici si utilizza un primer CON al 3' e dall'altra parte un primer con l'ultima base al 3' corrisp alla base mutata.
ma il mio dubbio � se si utilizza solo quel primer specifico o anche quello wild type...AIUTOOOO!!! LA PROF NN SA SPIEGARE!!!

ale5
Nuovo Arrivato

35 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2009 : 17:04:35

ciao, allora la tecnica � usata per rilevare single nucleotide polimorfisms e per vedere se in un certo locus � presente una mutazione puntiforme.
Come primer si utilizzano gli ASO (oligonucleotidi allele specifici) di 3 tipi diversi: 2 forward e uno reverse comune; i forward presentano l'ultimo nucleotide della sequenza che sar� uguale alla mutazione puntiforme ricercata. Si allestiscono poi 2 reazioni di PCR indipendenti con lo stesso DNA in esame e identiche condizioni (alta stringenza) che differiscono per� per il primer forward aggiunto.

miniprep
Nuovo Arrivato

8 Messaggi

Inserito il - 04 luglio 2009 : 19:31:18

GRAZIE....ma l'aso pcr � diversa?

elving
Utente Junior

240 Messaggi

Inserito il - 05 luglio 2009 : 00:30:40

la tecnica ASO prevede l'uso di sonde allele specifiche, che vanno ad ibridare il nostro DNA target precedentemente amplificato con PCR(solitamente l'ibridazione avviene in fase solida, tipo membrana di nylon dopo southern blotting).
la rivelazione avviene mediante chemioluminescenza o con reazioni colorimetriche.

per quanto riguarda l'ARMS, � una PCR che utilizza un primer allele specifico (ossia con il nucleotide in 3' complementare con la sequenza, mutata o normale).
la rivelazione in questo caso dipende se � avvenuta amplificazione o meno, quindi si vede essenzialmente con elettroforesi ed etidio bromuro.
Ale5, non � l'ASO, � l'ARMS questa!!

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 05 luglio 2009 : 09:25:27

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ale5
Nuovo Arrivato

35 Messaggi

Inserito il - 05 luglio 2009 : 11:37:18

mmm allora l'ASO qual'�?? io ho sempre chiamato ASO questo tipo di PCR...

elving
Utente Junior

240 Messaggi

Inserito il - 05 luglio 2009 : 12:02:17

la tecnica ASO � un'ibridazione con sonde allele specifiche. si fa dopo aver fatto una corsa elettroforetica degli amplificati da PCR ed averli blottati su nylon (southern blotting).
in pratica gli ASO (olionucleotidi allele specifici marcati) servono solo per evidenziare la mutazione (o la sequenza wt)

miniprep
Nuovo Arrivato

8 Messaggi

Inserito il - 06 luglio 2009 : 17:24:04

aiutooooo

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