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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
 Inserito il - 18 aprile 2006 : 18:25:23
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Mi sapete dare qualche informazione generale sull'utilizzo di questa camera per la conta cellulare?
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La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
 Inserito il - 18 aprile 2006 : 19:16:25
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ecco il mini protocollo che usavo:
Conta delle cellule in camera di Burker
-Dopo aver ben risospeso le cellule prelevarne 20 #956;l per coprire completamente la camera.
-Coprire con il vetrino copri-oggetto e contare al miscroscopio almeno 3 quadrati
(delimitati da 3 righe ), per ottenere un valore medio delle cellule.
- Il valore della media ottenuto corrisponde a 10^4 cellule per ml.
troppe cellule assieme sono difficili da contare, puoi diluire il campione moltiplicando poi x il fattore di diluizione utilizzato. |
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pisola83
Nuovo Arrivato
28 Messaggi |
Inserito il - 19 aprile 2006 : 09:33:17
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| la conta cellulare è un pò tediosa.il metodo di alexo direi sia quello che usavo anch' io. |
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
Inserito il - 19 aprile 2006 : 16:09:19
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Grazie!
Sapete darmi anche qualche informazione in più su come è strutturata la camera? (numero di quadrati, disposizione delle linee, ecc..)
In passato ho usato una camera contaglobuli per contare cellule spermatiche, ma credo che sia un po' diversa come organizzazione rispetto a quella di burker. |
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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Jarod99
Nuovo Arrivato
78 Messaggi |
Inserito il - 19 aprile 2006 : 18:31:58
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Ciao, questo è quello che ti posso dire. La prima parte si riferisce al protocollo utilizzato per la conta di cellule animali in coltura; la seconda parte è di ordine generale e il metodo di conta possa andar bene in generale (cambieranno solo i fattori di diluizione)
Immagine:
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biotech
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
170 Messaggi |
Inserito il - 19 aprile 2006 : 19:35:47
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Io la camera di Burker l'ho usata molto durante il tirocinio quando dovevo contare le cellule per splittarle poi. io contavo sempre le cellule di tre o quattro quadratoni (altrimenti ci lasciavo gli occhi  ) e poi la facevo la media. Spesso facevo una diluizione di 1:2 con tripan Blue per vedere la vitalità. Per cui la formula delle cellule totali era:
n. cellule contate x ml totali x 2(diluizione) x 10000 (se non ricordo male). Così le risospendevo in un volume tale da avere 1 milione di cellule per ml. |
http://boincstats.com/signature/user_1342603.gif |
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
Inserito il - 19 aprile 2006 : 23:32:55
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| Ok, grazie a tutti! |
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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Picorna
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
8 Messaggi |
 Inserito il - 08 dicembre 2006 : 21:34:36
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| Ragazzi ma che differenza c'è tra la camera di Burker e qlla di Petroff-Hausser? |
Picorna |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 08 dicembre 2006 : 22:06:00
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Sono essenzialmente la stessa cosa, cambia il volume dei quadratini e il pattern delle righe.
La camera di Burker ha celle da 1/25 mm2 alte 0.1 mm, la petroff hausser da 1/400 mm2 alte 0.1mm
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joleee80
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
24 Messaggi |
Inserito il - 08 dicembre 2006 : 23:20:53
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Anche io come biotech....coloravo con trypan blue 0,4%....... |
Ciò che mi nutre .......mi distrugge.... |
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Picorna
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
8 Messaggi |
Inserito il - 09 dicembre 2006 : 13:55:37
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Grazie 1000 chick80!  |
Picorna |
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Picorna
Nuovo Arrivato
Prov.: Roma
8 Messaggi |
Inserito il - 09 dicembre 2006 : 14:00:48
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Ma potrei dire che la conta fatta con la Petroff-Hausser è più prescisa...? Provo a spiegarmi! Essendo il volume dei quadratini minore... il numero di batteri che lo occuperanno sarà minore, di conseguenza il numero di batteri per ogni quadratino sarà più simile tra i diversi quadratini e quando andrò a fare la media e il calcolo per la conta dei batteri avrò una stima più precisa! Se ho scritto amenità ditelo pure eh!  |
Picorna |
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Sergej
Nuovo Arrivato
14 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2007 : 18:10:27
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Mi chiedo se quando parliamo di quadrati in cui effettuare il conteggio delle cell, stiamo parlando di quelli di lato 1/5 mm, come sembrerebbe dal grafico di Jarod99? Inoltre non capisco cosa intendeva AleXo dicendo Citazione:
contare al miscroscopio almeno 3 quadrati
(delimitati da 3 righe ) Citazione:
Dunque tra questi quadratri, la scelta di alcuni di essi non è indipendente dalla posizione relativa alle 3 linea che delimitano ciascuna cella? Infine, volendo eseguire il conteggio solo di 3 o 4 quadrati, come si calcola la media? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 17 marzo 2007 : 22:02:53
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La media la calcoli come numero di cellule TOTALI (cioè in tutti e 3 i quadrati) diviso per 3.
Solitamente molti contano i 3 quadrati su di una diagonale, ma non credo sia un problema contarne altri 3 o altri 4 se vuoi.
L'importante è che ne conti più di uno, fai la media dividendo il conto totale per il numero dei quadrati e poi trovi il numero di cellule relativamente al volume del quadratino, che puoi quindi riportare a numero di cellule/ml di soluzione.
Ovviamente il trucco qui sta tutto nell'avere una soluzione il più omogenea possibile e nè troppo concentrata nè troppo diluita :D |
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Sergej
Nuovo Arrivato
14 Messaggi |
Inserito il - 18 marzo 2007 : 17:59:28
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Ma allora mi chiedo, se un quadrato vale l'altro, perchè c'è chi si impegna in una scelta similmente oculata? Quindi, però, mi confermi che i quadrati sono quelli da 1/5mm?
Ad ogni modo per quanto riguarda la media ora è tutto più chiaro. Grazie! |
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MASATEAR
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
Inserito il - 14 gennaio 2011 : 15:33:09
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| ragazzi mi spiegate bene il calcolo da fare per contare le cellule nella camera burker??nal senso dopo aver contato per sapere le cellule totali ke ho come faccio? |
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memole
Utente Junior
Prov.: Brindisi
Città: brindisi
577 Messaggi |
Inserito il - 17 gennaio 2011 : 11:51:33
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Allora il procedimento è semplice:
una volta che hai contato le cellule calcoli la media aritmetica (hai contato 3 quadranti, dividi il numero delle cellule per 3). Dopo di che moltiplichi il valore che hai ottenuto per:
-10^4, che è il fattore di diluizione della camera. Questo ti permette di sapere quante cellule sono presenti in un ml di sospensione;
-fattore di diluizione relativo al terreno. Ad esempio, inizialmente hai le cellule risospese in 5 ml di terreno di coltura, il numero ottenuto con il passaggio precedente va moltiplicato anche per 5, in questo caso;
- eventulai altri fattori di diluizione. Se decisi di fare una conta vitale, ad esempio con Trypan Blue, potrebbe essere necessario diluire le cellule nel colorante 1:10. Bene, per sapere il numero totale delle cellule in sospensione dovrai tenere conto anche di questa diluizione.
Provo a scriverti un esempio numerico, così è ancora più facile.
Hai le cellule risospese in 5 ml di terreno di coltura
conti 3 quadranti: 30 cellule
fai la media aritmetica: 30:3= 10 cellule
Per sapere il numero totale di cellule in sospensione:
10 ( media delle cellule contate) * 10^4 (fattore di diluizione della camera) * 5 ml di sospensione= 500000 cellule
Spero di essere stata chiara.
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MASATEAR
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
Inserito il - 18 gennaio 2011 : 19:37:00
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| si si grazie mille!! |
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ElisaG
Nuovo Arrivato
1 Messaggi |
Inserito il - 04 aprile 2022 : 11:00:07
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Salve ragazzi,
ho un dubbio riguardo la camera Burker; non riesco a trovare da nessuna parte il fatto che la concentrazione sia di 10^4 cellule per ml.
Da dove si ricava il valore? Grazie mille! :) |
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Camera di Burker
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