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svante
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
 Inserito il - 14 luglio 2009 : 12:44:29
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Ciao, č la prima volta che scrivo nel forum, mi presento, il mio nick č svante, sono un dottorando di biochimica.
Brevemente, lavoro con cellule in sospensione (linee leucemiche)e solitamente misuro la loro vitalitā facendo il saggio MTT. Il protocollo che uso, e che ha sempre funzionato benissimo, prevede l'aggiunta di MTT alle cellule sospese nel loro usuale terreno di coltura.
Mi č invece capitato di dover fare un MTT su cellule sospese in HBSS ma in questo caso non ho avuto nessuna formazione di formazano; nemmeno nelle cellule non trattate.
Qualcuno ha avuto esperienze di questo tipo? Si puō fare l'MTT in HBSS? Ovviamente dependerā dal tipo cellulare e da cosa ci devo fare ma, orientativamente, quanto tempo possono stare le cellule in HBSS prima che inizino a "soffrire"? Nel mio caso le cellule sono state 30-40 minuti in HBSS prima dell'aggiunta di MTT e il saggio č poi proseguito per altre 2-3 ore.
grazie.
svante
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meme
Nuovo Arrivato
Cittā: roma
46 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2009 : 15:42:44
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Scusa svante io sto provando per la prima volta a fare il test dell'MTT mi potresti dare delle dritte.
Non riesco a capire come devo interpretare i dati dopo la misura dell'assorbanza.
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svante
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 15 luglio 2009 : 17:40:15
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| beh, l'assorbanza ti dā una stima diretta della vitalitā. qual č il tuo dubbio? |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 16 luglio 2009 : 22:30:20
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| perchč le metti in HBSS?io le lascio nel loro terreno e aggiungo solo 25 ul a pozzetto (in p96) di MTT diluito in PBS. E non ho mai avuto problemi nč con cellule in adesione nč in sospensione |
Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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svante
Nuovo Arrivato
5 Messaggi |
Inserito il - 22 luglio 2009 : 11:53:46
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anch'io lo faccio di norma in terreno e non ho mai avuto alcun problema.
ho provato a farlo in HBSS, solo in un caso specifico, perchč il trattamento precedente l'MTT lo dovevo fare forzatamente in HBSS, e a quel punto avrei preferito rimanere nello stesso medium.
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problemi con MTT
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