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Tat
Nuovo Arrivato
Città: Milano
33 Messaggi |
 Inserito il - 20 aprile 2006 : 23:49:19
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salve a tutti...ho una domanda da porre a tutti i biotecnologi che pratichino western blot....forse vi sembrerà una domanda stupida ....ma ve la pongo lo stesso: le proteine che vengono trasferite su filtro dopo sds-page sono denaturate giusto e come fanno gli anticorpi a riconoscerle?? Molti Ab riconoscono la conformazione spaziale degli Ab e come fanno se la proteina è linearizzata, soprattutto i policlonali??
Grazie a tutti  
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 21 aprile 2006 : 01:33:28
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La domanda non è stupida, anzi!
Se l'anticorpo riconosce una struttura tridimensionale che viene distrutta dall'SDS semplicemente non riconoscerà la proteina denaturata! In realtà il problema è più per i monoclonali che per i policlonali, perchè con un policlonale hai comunque più chance che almeno qualche anticorpo riconosca la proteina denaturata.
Questo è uno dei motivi per cui ad es. difficilmente un anticorpo che usi per immunoistochimica va bene anche per Western (e viceversa).
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Tat
Nuovo Arrivato
Città: Milano
33 Messaggi |
Inserito il - 21 aprile 2006 : 10:35:06
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Grazie Chick....questo è un dubbio che mi è venuto ieri pensando ai western che sto facendo questi giorni....quindi solo statisticamente i policlonali riconoscono le proteine denaturate e i monoclonali...devi essere molto più fortunata se lo riconoscono!!!La cosa strana però sta nel fatto che la maggior parte dei western derivano da sds-page....che comunque mi denaturano al proteina o se non altro ne cambiano la conformazione...com'è difficile il tutto!!!
Grazie comunque.
Ciao ciao |
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proteine e anticorpi
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