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Discussione

Tat
Nuovo Arrivato

Citt�: Milano

33 Messaggi

Inserito il - 20 aprile 2006 : 23:49:19

salve a tutti...ho una domanda da porre a tutti i biotecnologi che pratichino western blot....forse vi sembrer� una domanda stupida ....ma ve la pongo lo stesso: le proteine che vengono trasferite su filtro dopo sds-page sono denaturate giusto e come fanno gli anticorpi a riconoscerle?? Molti Ab riconoscono la conformazione spaziale degli Ab e come fanno se la proteina � linearizzata, soprattutto i policlonali??
Grazie a tutti

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 21 aprile 2006 : 01:33:28

La domanda non � stupida, anzi!

Se l'anticorpo riconosce una struttura tridimensionale che viene distrutta dall'SDS semplicemente non riconoscer� la proteina denaturata! In realt� il problema � pi� per i monoclonali che per i policlonali, perch� con un policlonale hai comunque pi� chance che almeno qualche anticorpo riconosca la proteina denaturata.

Questo � uno dei motivi per cui ad es. difficilmente un anticorpo che usi per immunoistochimica va bene anche per Western (e viceversa).

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Tat
Nuovo Arrivato

Citt�: Milano

33 Messaggi

Inserito il - 21 aprile 2006 : 10:35:06

Grazie Chick....questo � un dubbio che mi � venuto ieri pensando ai western che sto facendo questi giorni....quindi solo statisticamente i policlonali riconoscono le proteine denaturate e i monoclonali...devi essere molto pi� fortunata se lo riconoscono!!!La cosa strana per� sta nel fatto che la maggior parte dei western derivano da sds-page....che comunque mi denaturano al proteina o se non altro ne cambiano la conformazione...com'� difficile il tutto!!!
Grazie comunque.

Ciao ciao