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elisabiotech
Nuovo Arrivato
Città: roma
23 Messaggi |
 Inserito il - 25 settembre 2009 : 17:40:14
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ciao a tutti... ...c'è qualcuno che potrebbe spiegarmi come di forma il gradiente di pH nell'isoelettrofocalizzazione?so che si usano anfoliti che, una volta applicata la differenza di potenziale vanno a migrare e formano varie bande di pH. Ora, non riesco a capire in base a che principio si muovono...c'è un pH di base per il quale queste sostanze si muovono fino al punto isoelettrico?ma allora se raggiungono il punto isoelettrico avranno carica netta nulla e come fanno a creare un ambiente con un dato pH?mah...  help me...
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elisabiotech
Nuovo Arrivato
Città: roma
23 Messaggi |
Inserito il - 28 settembre 2009 : 19:44:37
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| ok raga...ho risolto lo stesso... |
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zerhos
Utente Junior
Prov.: Pisa
Città: Pisa
421 Messaggi |
Inserito il - 28 settembre 2009 : 20:42:20
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mmmmm,nn so se ti serva ancora,cmq provo a rispondere:
lungo la corsa sei te che generi un gradiente di pH che ad esempio va da 2 a 10;quindi aggiungi le tue proteine e le lasci migrare.
tranne per il loro punto isoelettrico,tutte le proteine a qualsiasi valore di pH presentano un certo grado di protonazione o deprotonazione per cui assumono sempre carica netta e se sottoposte ad una ddp queste ti migrano.ad un certo punto lungo la migrazione una data proteina giunge a quella "regione" della corsa in cui il pH corrisponde a quello necessario per il suo punto isoelettrico.In questa situazione il grado di protonazione sarà uguale al grado di deprotonazione e quindi la proteina nn presenterà più carica netta,(credo la si possa definire uno zwitterione),e nn essendo più sensibile ad una ddp,smetterà di migrare,fermandosi in quel punto.
Ora,ogni proteina,in virtù della propria struttura,presenta un PI differente,quindi in questo gradiente le varie proteine si fermeranno lungo la corsa la dove avranno raggiunto il loro punto isoelettrico.
il limite di questa tecnica però è che alcune proteine presentano il loro PI a valori di pH estremi,ed è difficile creare una corsa con un gradiente di pH che va da 0 a 14. |
"l'unica differenza tra me e un pazzo è che io non sono pazzo!"
Salvador.Dalì
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elisabiotech
Nuovo Arrivato
Città: roma
23 Messaggi |
Inserito il - 28 settembre 2009 : 21:01:51
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| grazie...quello che hai detto è tutto corretto...ma io intendevo proprio come si genera il gradiente...come faccio per creare questa scala di pH prima dell'inserimento del mio campione...comunque ho risolto leggendo qualcosa su internet...esistono piastre già pronte con anfoliti fissati oppure si usano delle soluzioni acide e basiche rispettivamente all'anodo ed al catodo...queste formano un gradiente molto instabile su cui migreranno gli anfoliti che lo stabilizzeranno...allora potrò inserire il campione...spero sia giusto...comunque grazie per le precisazioni...è sempre utile chiarirsi un pò le idee... |
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chick80
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isoelettrofocalizzazione..gradiente di pH?
Didattica e Relazioni
