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nannuto
Nuovo Arrivato
33 Messaggi |
 Inserito il - 01 ottobre 2009 : 10:18:00
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Alternativamente alla tripsina, posso staccare le mie cellule con lo scraper per poi riseminarle o rischio di rovinarle? Grazie!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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ariannat
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 01 ottobre 2009 : 11:17:24
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A parte che lo scraper a contatto con le cellule non mi piace (inquinamento), dato che solitamente si usa pretrattando le cells con un buffer di lisi allo scopo di rompere tutto, e poi le rovineresti di sicuro..
Citazione:
Messaggio inserito da nannuto
Alternativamente alla tripsina, posso staccare le mie cellule con lo scraper per poi riseminarle o rischio di rovinarle? Grazie!
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domi84
Moderatore
Città: Glasgow
1724 Messaggi |
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Garzgul
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Roma
183 Messaggi |
Inserito il - 01 ottobre 2009 : 12:44:52
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Infatti dice riseminarle, non riesaminarle.
Probabilmente intendeva chiedere se dopo il trattamente con lo scraper le cellule sono abbastanza vitali da essere ripiastrate. Questo purtroppo non lo so, in linea di massima so che per la preparazione di colture primarie la disaggregazione meccanica è meno efficiente ma dà una resa vitale più elevata rispetto a quella enzimatica o chimica ma non so se si può applicare lo stesso concetto...
Anche perchè non so cosa sia esattamente lo scraper! 
Per caso sarebbe il setaccio da laboratorio? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 01 ottobre 2009 : 13:28:19
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Citazione:
Infatti dice riseminarle, non riesaminarle.
E' vero! Allora, in quel caso direi che probabilmente con lo scraper le danneggi un po' troppo.
Citazione:
A parte che lo scraper a contatto con le cellule non mi piace (inquinamento)
Basta usare scrapers sterili!
Citazione:
Anche perchè non so cosa sia esattamente lo scraper!
Un affare così:  che ti serve a staccare cellule aderenti alla piastra. |
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plof
Nuovo Arrivato
13 Messaggi |
Inserito il - 01 ottobre 2009 : 16:50:28
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Citazione:
Messaggio inserito da nannuto
Alternativamente alla tripsina, posso staccare le mie cellule con lo scraper per poi riseminarle o rischio di rovinarle? Grazie!
Con lo scraper puoi staccarle ma non disaggregarle. Per seminarle e ottenere una resa buona e uniforme devi anche disaggregarle (con enzimi proteolitici e/o chelanti Ca e Mg + spipettamento) |
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Luis 22
Utente
Città: Bari
755 Messaggi |
 Inserito il - 01 ottobre 2009 : 19:15:46
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Dipende anche dal tipo di cellule!
In passato, al posto della tripsina, usavo una soluzione PBS-EDTA e lasciavo 10-15 minuti in incubatore...si staccavano completamente! |
 
La vita e i sogni sono fogli di uno stesso libro. Leggerli in ordine è vivere, sfogliarli a caso è sognare. (Arthur Schopenhauer)& |
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Garzgul
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Roma
183 Messaggi |
Inserito il - 01 ottobre 2009 : 20:10:23
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Grazie per la risposta Chick!
Finalmente ho scoperto la spatola da laboratorio!
Comunque Nannuto la tua è una domanda puramente teorica o ha un risvolto pratico in cui è necessario l'utilizzo dello scraper? Inoltre se magari specifici se ti riferisci a un tipo particolare di cellule, magari qualcuno degli utenti più esperti qui presenti potrebbe risponderti più facilmente!
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nomis
Nuovo Arrivato
Città: roma
16 Messaggi |
Inserito il - 06 ottobre 2009 : 13:08:13
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| io non lo userei..... comunque provochi sicuramente un danno meccanico maggiore rispetto alla tripsina.. non credo ne avresti alcun vantaggio... |
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Saretta
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Provincia di Roma
263 Messaggi |
Inserito il - 08 ottobre 2009 : 19:50:54
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Io ho avuto delle cellule tumorali che non si staccavano con la tripsina e basta anche se la mettevo a litri. Prima che capissi dov'era il problema usavo lo scraper sterile assieme alla tripisina, se scrapi con mano delicata ti sopravvivono...
Certo le mie erano belle cattive eh  |
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King D
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Acerra
98 Messaggi |
Inserito il - 18 ottobre 2009 : 13:27:02
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
Basta usare scrapers sterili!
sempre meglio la tripsina
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Gst
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Ariccia
143 Messaggi |
Inserito il - 30 ottobre 2009 : 21:22:04
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Qlla di screperare le cellule in tripsina per staccarle è una pratica che usa una mia collega con i MEF (linea primaria di fibroblasti embrionali murini). Ovviemente lo scraper (rigorosamente sterile) ti permettedi staccarle dalla piastra, poi devi spipettarle per separarle tra loro!
D'altra parte a mio avviso è una tecnica moooolto aggressiva, che nn mi piacerebbe usare, anche se le cellule della mia collega sopravvivevano eh!
Io lavoro sulle stesse cellule della mia collega e data la difficoltà per staccarle faccio 2 lavaggi in PBS prima di mettere la tripsina (per esseresicura di togliere la meglio residui di terreno e sopratt siero, ke contengono inibitori della tripsina) e poi metto la tripsina e lascio qualke minuto a 37°C. Poi scuoto un po' la piastra e le cellule si staccano a mo' di foglietto. Dopodikè le spipetto molto per separarle bene.
Non so se può esserti utile tutto ciò. Fammi sapere se e come hai risolto!  |
Ascoltami con gli occhi... |
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biomolecola
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
40 Messaggi |
Inserito il - 03 novembre 2009 : 18:20:08
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Pessima idea quella dello scraper...meglio la tripsina!
Con lo scraper è vero che le stacchi, ma dalla piastra e non tra di loro => vengono ripiastrate uno schifo! Ne perdi anche una quantità decisamente superiore! Io sono contraria! |
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staccare cellule con scraper?
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