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bio_Logos
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Inserito il - 18 ottobre 2009 : 18:53:07  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di bio_Logos Invia a bio_Logos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Un saluto a tutti..
Volevo sapere se c'è qualcuno che riesce a spiegarmi una volta per tutte come funziona la tecnica del voltage clamp. Ho trovato una discussione qui sul forum (un pò datata) su questo argomento, ma volevo avere informazioni più dettagliate riguardo al meccanismo vero e proprio, ovvero su come e cosa si registra effettivamente (ho molta confusione su correnti e potenziali...)!!!!

Grazie in anticipo a chi saprà damri una risposta...

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 19 ottobre 2009 : 22:49:00  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Beh, l'idea è che puoi comparare la cellula ad un circuito elettrico con una certa resistenza.
Secondo la legge di Ohm dV = R * dI, dove V = voltaggio e I = corrente.

Siccome la R non cambia (in realtà non è così, ma diciamo di sì x semplicità) tu puoi bloccare uno dei 2 parametri (voltaggio o corrente) e misurare l'altro.
Se blocchi il voltaggio (voltage clamp, ovvero imponi un voltaggio stabilito da te alla cellula) misuri la corrente che passa nella cellula, se blocchi la corrente (current clamp, ovvero imponi una certa corrente) puoi misurare il voltaggio.

Es. per misurare il potenziale di riposo puoi andare in current clamp e bloccare la corrente a 0 pA. In questo modo non stai nè eccitando nè inibendo la cellula e il potenziale misurato è quello spontaneo.

Si potrebbero (e già è stato fatto) scrivere libri a riguardo... se hai domande + precise chiedi pure!

ciao

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bio_Logos
Nuovo Arrivato



16 Messaggi

Inserito il - 21 ottobre 2009 : 21:21:14  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di bio_Logos Invia a bio_Logos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
mmm...ok...qualcosa sto cominciando a capire...

il dubbio che mi rimane però è: se blocco il voltaggio (e quindi lo blocco ad ex al potenziale di riposo della membrana cellulare), per misurare le variazioni di corrente devo portare il potenziale di riposo a valori sempre più positivi (se voglio studiare ad ex i potenziali d'azione) in modo da poter registrare come ioni sodio e potassio principalmente si muovono (e quindi generano corrente) attraverso la membrana...???
forse mi sono spiegato maluccio, ma sostanzialmente il modo (o uno dei possibili modi) in cui si procede nell'analisi in voltage clamp, è questo??

Grazie comunque per la risposta, ho già sgomberato un pò di dubbi...
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chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi

Inserito il - 21 ottobre 2009 : 22:36:05  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Sì esatto, puoi fare degli step di voltaggio per evocare potenziali d'azione, anche se può non essere necessario. Ad es. se la cellula riceve degli input sinaptici, quelli possono essere sufficienti per evocare potenziali d'azione spontanei.

Qui indicavo un po' di links che potrebbero eserti utili: http://www.molecularlab.it/forum/topic.asp?TOPIC_ID=14769

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