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paolo
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
 Inserito il - 15 aprile 2004 : 12:06:51
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Ciao a tutti,
Ho estratto del dna per la mia tesi di laurea,
ora devo quantificarlo per preocedere alla reazione di pcr, non avendo a disposizione uno spettro fotometro ho usato un dna ladder.
In questo modo mi è risultato un po impreciso quantificare il mio dna estratto. La mia domanda è :posso usare un protocollo del genere?
Se si di quanto dna templato ho bisogno? C'è bisogno di una precisa concentrazione o va bene anche un range di concentrazioni come mi consiglia il metodo da me usato?
Fiducioso in una vostra risposta vi ringrazio
Paolo
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 15 aprile 2004 : 23:11:00
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La cosa migliore sarebbe trovare qualcuno che ti faccia usare il suo spettrofotometro... o il risultato non sarà poi così preciso.
Inoltre dipende molto da quello che devi fare dopo.
Se hai bisogno di informazioni qualitative (es. se un gene è espresso o meno) potrebbe non essere così importante una quantizzazione precisa. Se invece vuoi avere dati quantitativi (es. real-time PCR), allora in quel caso è necessario fare una quantizzazione iniziale molto precisa.
Ricorda che comunque quando fai la PCR ci deve essere un rapporto ottimale tra DNA, primers, Taq e nucleotidi, perchè se uno dei componenti è in eccesso o in difetto rispetto agli altri, la reazione potrebbe non avvenire correttamente.
nICO |
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paolo
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 16 aprile 2004 : 13:53:31
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Grazie Nico,
Devo fare analisi dei RAPD.
Ciao |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 16 aprile 2004 : 19:18:14
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Premetto che non ho mai fatto analisi RAPD ma, per quanto ne so, la cosa è puramente qualitativa, quindi anche se non hai proprio le stesse concentrazioni per tutti i campioni, non dovrebbe succedere nulla...
Nota che comunque non ci deve essere moltissima differenza, perchè la concentrazione del templato può influenzare il risultato dell'esperimento, soprattutto in analisi come la RAPD che non usa primer specifici.
Ciao!
nICO |
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paolo
Nuovo Arrivato
4 Messaggi |
Inserito il - 18 aprile 2004 : 16:28:14
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Grazie mille Nico mi sei stato molto di aiuto
Ciao Paolo |
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concentrazione di dna templato
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