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GFAP
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
 Inserito il - 12 novembre 2009 : 18:19:05
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Salve a tutti,
ho un problema con il lysis buffer per western blot.
Qualcuno sa consigliarmi un lysis completo per avere l'estrazione totale (nucleo e citoplasma) anche di proteine fosforilate?
Grazie
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chick80
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GFPina
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Inserito il - 12 novembre 2009 : 18:55:43
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| e sopratutto se hai bisogno delle proteine fosforilate aggiungi anche gli inibitori delle fosfatasi! |
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chick80
Moderatore
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GFPina
Moderatore
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Inserito il - 12 novembre 2009 : 22:23:08
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Citazione:
Messaggio inserito da chick80
(ci sono già in quei protocolli  )
ah ok hai ragione!  Nel Cocktail di inibitori delle proteasi indicato nei protocolli in effetti sono presenti Sodio Ortovanadato e Sodio Fluoruro che sono inibitori delle fosfatasi. Però spesso si tende ad usare cocktail già pronti che non sempre contengono anche inibitori delle fosfatasi e inoltre esistono anche cocktail di inibitori delle fosfatasi che sono più efficaci. (ad es. è presente anche beta-glicerofosfato che a quanto ne so è un inibitore più potente rispetto a NaVO3 e NaF).
Insomma, in ogni caso assicurati di avere gli inibitori delle fosfatasi nel tuo buffer. |
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lysis
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