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coccinellas
Utente Junior
Città: l'isola che non c'è
138 Messaggi |
 Inserito il - 13 novembre 2009 : 19:32:12
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Salve ragazzi, mi sapete spiegare perchè in alcuni protocolli per western il TBS è preparato con tween 20 ed in altri no? Da cosa dipende??
Grazie
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angemore
Nuovo Arrivato
82 Messaggi |
Inserito il - 14 novembre 2009 : 09:18:35
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Il tween è un detergente e si usa di solito nei western per blot per lavare via eventuali legami aspecifici che si formano tra l'anticorpo e le proteine. Ciò ti permette di diminuire molto il background e di rendere più chiaro il segnale.
Per farti un esempio, io uso di solito il tween allo 0.005% quando faccio i lavaggi di un western in cui ho una proteina molto espressa per avere un segnale più pulito. Anni fa invece, ho dovuto eliminare il tween e sostituire il TBS con il PBS perchè avevo una proteina poco espressa e volevo rendere meno stringenti le condizioni di lavaggio.
Bisogna tenere conto non solo dell'espressione della tua proteina ma anche ad esempio dell'Ab che usi (se usi un goat di solito il segnale è più sporco e si usa il tween nei lavaggi, ecc..
Spero di essere stata chiara   |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 14 novembre 2009 : 11:01:45
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Piccolissima puntigliosa precisazione: se dici TBS allora intendi senza Tween.
Quando includi il Tween lo chiami TBS-T (o TBS-Tween) |
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coccinellas
Utente Junior
Città: l'isola che non c'è
138 Messaggi |
Inserito il - 15 novembre 2009 : 11:52:47
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Grazie ,siete stati chiarissimi.
Un collega mi diceva che il TBS-T si usa solo nell'ECL , e poichè io uso NTB/BCIP per la rivelazione mi consigliava di non usare il semplice TBS. Quindi non è proprio esatto questo consiglio? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 15 novembre 2009 : 17:17:48
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Citazione:
Messaggio inserito da coccinellas
Un collega mi diceva che il TBS-T si usa solo nell'ECL
concordo che il tween è importante per i lavaggi.
Inoltre io sapevo che può interferire con l'ECL (o similari) è quindi consigliato prima di mettere l'ECL fare l'ultimo lavaggio in TBS e non TBS-T. |
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TBS e TWEEN 20
Didattica e Relazioni
