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Crick82
Utente Junior
139 Messaggi |
 Inserito il - 30 maggio 2006 : 16:17:23
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Ciao a tutti!!!
Vi volevo chiedere un'informazione, dopo il trasferimento e dopo i vari passaggi di blocking e di incubazione con l'anticorpo primario e l'anticorpo secondario, si devono ovviamente rivelare le proteine sulla membrana. Voi in lab utilizzate preferenzialmente il Chemidoc o le lastre per osservare il risultato del western? Quali sono sostanzialmente le differenze tra le due tecniche? Quando conviene un sistema e quando l'altro? In termini tecnici come vengono indicati i due metodi diversi?
Anche se sembrano parecchie domande, in realtà per persone esperte di laboratorio non dovrebbero esserci problemi a soddisfare queste curiosità.
Attendo delucidazioni 
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Tat
Nuovo Arrivato
Città: Milano
33 Messaggi |
Inserito il - 30 maggio 2006 : 18:48:09
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 Ciao io uso generalmente le lastre e purtroppo non ho esperienza con i chemidoc...posso dire però che se quest'ultimo è simile al gel doc..allora il risultato sembra più reale usando le lastre.
E' anche vero però che usando il chemidoc tu puoi fare sicuramente una determinazione quantitativa migliore rispetto a quella fatta con le lastre che è generalmente fatta ad occhio!!!
Quindi dipende da quello che cerchi se un risultato qualitativo o quantitativo!!!
Queste sono le mie impressioni!!!
Ciao |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 30 maggio 2006 : 22:33:11
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Noi abbiamo da poco acquistato il chemidoc e... sarà che non ci abbiamo ancora preso la mano ma non otteniamo dei gran risultati, con le lastre abbiamo sempre dei segnali maggiori!
Per ora li stiamo usando in contemporanea per cercare di prenderci un po' più la mano e ottenere risultati paragonabili, quindi prima esponiamo la lastra e poi mettiamo la membrana nel chemidoc.
Citazione:
E' anche vero però che usando il chemidoc tu puoi fare sicuramente una determinazione quantitativa migliore rispetto a quella fatta con le lastre che è generalmente fatta ad occhio!!!
Quindi dipende da quello che cerchi se un risultato qualitativo o quantitativo!!!
Per quanto riguarda la quantificazione con il chemidoc puoi anche scannerizzare la lastra e il software ti permette di fare l'analisi quantitativa. |
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Crick82
Utente Junior
139 Messaggi |
Inserito il - 30 maggio 2006 : 22:48:29
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Quindi se si vuole ottenere una quantizzazione precisa lo si può fare anche con le lastre, dapprima scannerizzandola e poi utilizzando un software per la quantizzazione. Il software che si utilizza è sempre il QuantityOne?
Forse un inconveniente delle lastre è che costano molto? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 30 maggio 2006 : 22:55:13
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beh sicuramente i costi sono inferiori perchè non devi comprare nè lastre, nè reagenti per svilupparle... mai i risultati non so se sono migliori!
Si il software è sempre il QuantityOne! |
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Crick82
Utente Junior
139 Messaggi |
Inserito il - 09 giugno 2006 : 22:38:43
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| Per definire i due sistemi di rilevazione del segnale, l'utilizzo del chemidoc viene definito chemiluminescenza? L'uso delle lastre autoradiografia? |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 10 giugno 2006 : 01:53:05
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| No, l'autoradiografia e' fatta con materiale radioattivo (es in situ hybridization radioattiva oppure northern/southern blot). Per il western blotting, invece, si parla di chemiluminescenza anche con le lastre. |
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nico
Nuovo Arrivato
Prov.: Arezzo
Città: arezzo
5 Messaggi |
Inserito il - 10 giugno 2006 : 13:50:18
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| Anche noi utilizziamo solo lastre... e dopo la densitometria usiamo MELANIE come softwere per l'analisi di imaagine... |
"A hen is only an egg's way of making another egg." |
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wolverine1982
Nuovo Arrivato
Prov.: Bari
Città: Andria
10 Messaggi |
Inserito il - 02 luglio 2009 : 12:45:09
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| ragazzi scusatemi...fatemi capire...si può mettere la membrana nel chemidoc dopo averla processata fino ad aver messo il substrato ecl e si riesce a vedere un segnale nitido di chemiluminescenza? |
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GFPina
Moderatore
Città: Milano
8408 Messaggi |
Inserito il - 02 luglio 2009 : 15:25:14
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Citazione:
Messaggio inserito da wolverine1982
ragazzi scusatemi...fatemi capire...si può mettere la membrana nel chemidoc dopo averla processata fino ad aver messo il substrato ecl e si riesce a vedere un segnale nitido di chemiluminescenza?
SI!
Il chemidoc ha una telecamera sensibile alla chemiluminescenza, in pratica anziché impressionare una lastra il segnale viene "letto" dalla telecamera e avrai un'immagine che corrisponde a quello che vedi sulla lastra!
Visto che sono passati più di 3 anni da questa discussione e il Chemnidoc nel frattempo l'ho usato parecchio (ci sono anche altre discussioni in proposito) se hai altre domande fai pure!  |
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Western blotting
Didattica e Relazioni
