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Retroviral
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
 Inserito il - 09 dicembre 2009 : 14:45:59
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Buongiorno a tutti.
Avrei una domanda da porre.
Ho dei problemi di crescita con le 293T, vorrei sapere se siete a conoscienza dei motivi per cui queste cellule di essere transfettabili
Siamo certi che non si tratta di un problema di reagenti e di contaminazione da mycoplasma (sono state gia testate)
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 09 dicembre 2009 : 17:13:55
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Ciao, io uso spesso 293T per transfezione di costrutti lentivirali:
non mi è chiara la domanda, hai problemi a transfettarle?
Oppure non ti crescono?
Se è la prima, potrebbe essere dovuto al fatto che hanno subito
troppi passaggi? noi usiamo preferibilmente aliquote low passage
(due, tre passaggi al max) |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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Retroviral
Nuovo Arrivato
3 Messaggi |
Inserito il - 11 dicembre 2009 : 16:34:34
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| entrambi, crescono male e si trasfettano male.. |
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nomis
Nuovo Arrivato
Città: roma
16 Messaggi |
Inserito il - 15 dicembre 2009 : 17:17:41
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anch'io le uso spesso.. e in genere sono considerate cellule "facili".. ma che intendi crescono male? cioè un difetto che hanno è quello di aggregarsi molto cioè se non le spipetti bene quando le piastri fanno delle specie di isole con una morfologia differente dal normale. però se le stesse le stacchi e le riattacchi cercando di disgregaarle si dispongono e crescono molto bene.. io le trasfetto con lipo 2000....
mi spiace non credo di esserti stata un granchè utile... |
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d.goldy
Nuovo Arrivato
39 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2009 : 01:22:01
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Ciao, io trasfetto le 293T da un sacco ed anch'io ho sempre saputo che sono cells facili, noi le trasfettiamo con jet/pei che non ha il problema di essere tossico in presenza di antibiotico e non abbiamo mai avuto problemi (le ho trasfettate anche con 3 plasmidi).
Quando mi crescevano male, con una morfologia come ha detto Nomis, a mucchietti, anche se le pipetti molto bene e sei sicuro che siano ben seminate, ho provato a cambiare il brodo. Il DMEM che usiamo noi contiene L-glutammina e si dissocia producendo ammine dopo 2 o 3 settimane oppure se ce ne poco nella bottiglia (magari si ossida...non lo so) comunque rifacendo il brodo si riprendevano.
Infine non usarle mai dopo il 20 passaggio, circa, ho sentito di gente che le usava fino al 25esimo o anche 30mo ma io non lo farei.
Buona fortuna
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Problemi crescita di colture cellulari
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