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fabio
Nuovo Arrivato
29 Messaggi |
 Inserito il - 15 giugno 2006 : 12:48:29
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ciao, dovrei purificare una proteina ricombinante con coda di istidina mediante cromatografia per affinità con nickel.
Il problema è che non posso utilizzare l'imidazolo per l'eluizione. Qualcuno può per cortesia indicarmi un alternativa all'imidazolo.
grazie.
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 15 giugno 2006 : 13:57:13
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Perche' non puoi usare l'imidazolo? Ho guardato un po' in giro ma un po' tutti usano imidazolo come eluente x la cromatografia con nickel.
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fabio
Nuovo Arrivato
29 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2006 : 10:36:39
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non posso usare l'imidazolo perche la proteina ricombinante che devo purificare è un inibitore spefifico di alcune proteasi. Ho scoperto che una proteasi, la catepsina B, (che testo per saggiare l'attività inibitoria della proteina purificata) è inibita anche dall'imidazolo presente nel mio campione. Ho provato con Gel filtrazione, Dialisi, ma nulla da fare forse basta una sola molecola di imidazolo ad inibire la cathepsina.
ciao
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Miss Adenina
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
45 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2006 : 16:08:47
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forse sbaglio... ma azzardo a dare un suggerimento
non puoi usare la crom a scambio ionico?
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fabio
Nuovo Arrivato
29 Messaggi |
Inserito il - 19 giugno 2006 : 16:35:20
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si ho provato ma ottengo una pessima resa dal momento che per la natura delle mie proteine ricombinanti l'espressione indotta in bl21de3 (E. Coli) e molto bassa e poi mi porto dietro schifezze.
La cromatografia per affinità mi permette un alta resa ma il problema è che devo usare l'imidazolo. |
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cromatografia
Didattica e Relazioni
