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fabio
Nuovo Arrivato



29 Messaggi
Inserito il - 15 giugno 2006 : 12:48:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di fabio Invia a fabio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
ciao, dovrei purificare una proteina ricombinante con coda di istidina mediante cromatografia per affinità con nickel.
Il problema è che non posso utilizzare l'imidazolo per l'eluizione. Qualcuno può per cortesia indicarmi un alternativa all'imidazolo.
grazie.

chick80
Moderatore

DNA

Città: Edinburgh


11491 Messaggi
Inserito il - 15 giugno 2006 : 13:57:13  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di chick80 Invia a chick80 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Perche' non puoi usare l'imidazolo? Ho guardato un po' in giro ma un po' tutti usano imidazolo come eluente x la cromatografia con nickel.
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fabio
Nuovo Arrivato



29 Messaggi
Inserito il - 19 giugno 2006 : 10:36:39  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di fabio Invia a fabio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
non posso usare l'imidazolo perche la proteina ricombinante che devo purificare è un inibitore spefifico di alcune proteasi. Ho scoperto che una proteasi, la catepsina B, (che testo per saggiare l'attività inibitoria della proteina purificata) è inibita anche dall'imidazolo presente nel mio campione. Ho provato con Gel filtrazione, Dialisi, ma nulla da fare forse basta una sola molecola di imidazolo ad inibire la cathepsina.

ciao
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Miss Adenina
Nuovo Arrivato

Miss Adenina

Prov.: Napoli


45 Messaggi
Inserito il - 19 giugno 2006 : 16:08:47  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Miss Adenina Invia a Miss Adenina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
forse sbaglio... ma azzardo a dare un suggerimento
non puoi usare la crom a scambio ionico?
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fabio
Nuovo Arrivato



29 Messaggi
Inserito il - 19 giugno 2006 : 16:35:20  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di fabio Invia a fabio un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
si ho provato ma ottengo una pessima resa dal momento che per la natura delle mie proteine ricombinanti l'espressione indotta in bl21de3 (E. Coli) e molto bassa e poi mi porto dietro schifezze.
La cromatografia per affinità mi permette un alta resa ma il problema è che devo usare l'imidazolo.
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