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 aiuto: trasformazione o trasfezione di cellule eucariotiche?
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adelaide893
Nuovo Arrivato



1 Messaggi

Inserito il - 04 maggio 2010 : 17:04:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di adelaide893 Invia a adelaide893 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
salve, mi servirebbe una delucidazione: dovrei cercare dei metodi per la trasformazione e trasfezione di cellule EUCARIOTICHE...ho notato che su alcuni siti è corretto usare entrambi i termini, su altri che si usa unicamente il termine "trasfezione", per quanto rigurda le cellule eucariotiche.
potreste aiutarmi a chiarire questo dubbio? e potreste elencarmi i suddetti metodi? vi ringrazio.

kristanko
Utente Junior

Città: Bologna


123 Messaggi

Inserito il - 04 maggio 2010 : 17:32:37  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kristanko Invia a kristanko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
per quanto ne so io.. Trasformazione è per l'inserimento di plasmidi nei batteri. Nel caso di cellule eucariotiche si parla di Trasfezione. E per la trasfezione le tecniche possibili sono diverse, e per mia esperienza sembra che la tecnica migliore dipende un po' dalla linea cellulare.
In ogni caso mi vengono in mente alcune tecniche:
DNA veicolato con virus
DNA veicolato con vescicole lipidiche (economico e tutto sommato molto efficace)
Banale paraformaldeide al 4% che se usata per tempi ridotti non fissa le cellule ma crea dei pori attraverso cui il dna può "infilarsi" letteralmente nelle cellule
Esiste ed è in commercio una macchina CHE non mi ricordo il nome che agendo sulle cellule con ddp crea dei pori attraverso cui veicola il dna.

Ti ho detto quel poco che so sperando possa servirti! Ciao!


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GFPina
Moderatore

GFPina

Città: Milano


8397 Messaggi

Inserito il - 05 maggio 2010 : 10:44:35  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di GFPina  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di GFPina Invia a GFPina un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Citazione:
Messaggio inserito da kristanko

Esiste ed è in commercio una macchina CHE non mi ricordo il nome che agendo sulle cellule con ddp crea dei pori attraverso cui veicola il dna.

Elettroporatore, ne esistono diversi in commercio.

Comunque se vuoi un breve riassunto sulla trasfezione e i metodi utilizzati puoi guardare anche wikipedia: http://it.wikipedia.org/wiki/Trasfezione
e per la trasformazione: http://it.wikipedia.org/wiki/Trasformazione_batterica
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AndreaPicol
Nuovo Arrivato



14 Messaggi

Inserito il - 08 maggio 2010 : 19:30:58  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AndreaPicol Invia a AndreaPicol un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Metodo del calcio-fosfato: si fa complessare il DNA con sali per formare un deposito di calcio fosfato poi fornito alle cellule in coltura che lo acquisiscono per endocitosi.

Elettroporazione: è il metodo con l'elettroporatore che con l'elettricità danneggia la membrana e permette il passaggio del DNA; altissima percentuale di morte cellulare, ma quelle che soppravvivono vengono transfettate.

Gene gun: "pistola" che spara sfere d'oro complessate al DNA verso le cellule;

Microiniezione: vista la complessità viene utilizzato per fecondazione assistita perchè ha una resa del 100%, ma è lentissimo.
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kristanko
Utente Junior

Città: Bologna


123 Messaggi

Inserito il - 09 maggio 2010 : 11:04:17  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di kristanko Invia a kristanko un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
mi sa che il gene gun è solo per cellule vegetali...
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DJC
Nuovo Arrivato

Prov.: TS
Città: Trieste


35 Messaggi

Inserito il - 09 maggio 2010 : 16:47:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di DJC Invia a DJC un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
credo che gene gun sia stato ideato per le cellule vegetali, ma ci sono pubblicazioni su vaccini a DNA attraverso l'epidermide con gene gun; comunque non ne ho grande esperienza anche perchè non credo sia una tecnica molto diffusa;
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