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Discussione |
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Heather
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: Montorio al Vomano
12 Messaggi |
 Inserito il - 11 maggio 2010 : 20:22:08
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Salve a tutti!Sono una studentessa di Scienze Biologiche (laurea specialistica in Biologia sanitaria)ed ho avuto un piccolo problema con delle sezioni di cervello di topo tagliate al criostato per esperimenti di immunofluorescenza: in pratica,queste sezioni sono completamente "bucherellate", tanto da rendere difficile il riconoscimento di componenti tissutali (per es. l'ippocampo)! Da cosa potrebbe dipendere?da un congelamento troppo rapido dell'organo prima del taglio? oppure è una caratteristica della tecnica al criostato? Grazie a chiunque possa darmi delle spiegazioni!
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cidsmoke
Utente Junior
534 Messaggi |
Inserito il - 12 maggio 2010 : 19:39:13
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| Forse potrebbe dipendere da un congelamento troppo lento.. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Caffey
Utente Attivo
Città: Perugia
1496 Messaggi |
Inserito il - 12 maggio 2010 : 20:09:22
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Citazione:
Messaggio inserito da cidsmoke
Forse potrebbe dipendere da un congelamento troppo lento..
E' possibile. Il congelamento deve essere il più veloce possibile in moda da evitare che si formino cristalli all'interno.
A che spessore tagli? |
[...] Hunc igitur terrorem animi tenebrasque necessest
non radii solis neque lucida tela diei
discutiant, sed naturae species ratioque. [...]
Titus Lucretius Carus |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 12 maggio 2010 : 20:12:40
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| sì dipende dal congelamento..non ci ricaverai nulla di buono da quelle sezioni.. |
Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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cidsmoke
Utente Junior
534 Messaggi |
Inserito il - 13 maggio 2010 : 09:10:14
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| Il congelamento deve essere il più veloce possibile,in modo da avere la formazione di tanti piccolissimi cristalli e non di pochi grandi cristalii(sono proprio questi che rovinano il tessuto!) |
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Heather
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: Montorio al Vomano
12 Messaggi |
Inserito il - 13 maggio 2010 : 17:50:25
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Citazione:
E' possibile. Il congelamento deve essere il più veloce possibile in moda da evitare che si formino cristalli all'interno.
A che spessore tagli?
Taglio con uno spessore tra gli 8 e i 10 micron...cmq grazie a tutti per le risposte!ma quindi secondo voi per l'immunofluorescenza devo rinunciare alle sezioni tagliate al criostato se ho bisogno che la morfologia del tessuto rimanga il più possibile invariata?
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 13 maggio 2010 : 19:15:45
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| no no si possono fare benissimo IF e IHC su congelato il problema è se il congelamento non è avvenuto correttamente.. in quel caso puoi far tutte le sezioni che vuoi ma la morfologia verrà 'na schifezza |
Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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Heather
Nuovo Arrivato
Prov.: Teramo
Città: Montorio al Vomano
12 Messaggi |
Inserito il - 13 maggio 2010 : 19:56:12
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ok grazie! purtroppo però il congelamento non lo esegue il laboratorio dove sono io...quindi io personalmente posso fare ben poco! In ogni caso,quale sarebbe la procedura per un corretto congelamento prima del taglio? premetto che nel mio caso il cervello è stato congelato per conservarlo a -20°C e tagliarlo successivamente...cioè nn è stato congelato direttamente nel mezzo per il taglio al criostato(es: OCT). Grazie ancora...questo forum è utilissimo e frequentato da utenti efficienti e disponibili!!! |
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Gst
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Ariccia
143 Messaggi |
Inserito il - 14 maggio 2010 : 19:40:47
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Eh... heater... allora è proprio quello il problema!!!
Nel momento in cui prendi l'organo dall'animale devi fissarlo e poi congelarlo immediatamente in oct (a -80°C). Se lo congeli a -20 prima di fissarlo e includerlo in oct, ti si formano un sacco di spaccature nel tessuto....
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Ascoltami con gli occhi... |
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biotool
Nuovo Arrivato
97 Messaggi |
Inserito il - 27 aprile 2012 : 18:27:57
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ciao a tutti!
Ho dei tessuti cerebrali tumorali e non, semplicemente congelati a -80 senza fissativo o altro. Dovro' farci delle immunofluorescenze per valutare l'espressione di due proteine e d esperimenti con LCM per valutarne il trascritto.
Il mio dubbio e' come tagliare questi tessuti per ottenere sezioni da 5 uM in condizioni ottimali per i successivi esperimenti.
Devo includere in OCT il tessuto (usando il sistema metil-butano-ghiaccio secco) e poi tagliare al criostato?
ho fatto una breve ricerca e credo che questo sia il topic piu' adatto, spero nei vostri consigli per capire come potermi muovere
grazie mille! |
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Sezioni tagliate al criostato
Didattica e Relazioni
