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mari82
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
 Inserito il - 02 giugno 2010 : 17:44:46
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Volevo farvi una domanda... è possibile dopo aver estratto le proteine con il ripa buffer concentrarle se il campione risulta troppo diluito?
Grazie mille
Marianna
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 02 giugno 2010 : 17:57:04
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Se le precipiti e poi le risospendi nel volume che vuoi tu? forse le potresti essiccare al vacuum e poi risospenderle, nn so... Probabilmente trovi anche dei kit in commercio (spin columns o filtri) per poter concentrare le proteine, guarda un pò in giro  |
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paolo865
Utente Junior
Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco
262 Messaggi |
Inserito il - 02 giugno 2010 : 18:11:14
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| Cosa devi fare? Perchè se devi caricare i campioni su gel per sds.page potresti calcolare il volume corrispondente ai ug di proteica che devi caricare e calcolare il volume di SB4X (o Laemmli) che dovresti aggiungervi. Quindi aggiungi lo stesso volume ma di SB2X e fai bollire i campioni fino a dimezzarne circa il volume o per lo meno raggiungere il massimo volume caricabile su gel |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 02 giugno 2010 : 23:00:30
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| anche io, come spemann, userei lo speed vacuum |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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Morfeo
Nuovo Arrivato
Città: Roma
110 Messaggi |
Inserito il - 03 giugno 2010 : 08:16:42
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| Io uso dei concentratori, praticamente sono delle falcon con una colonna con un filtro che funziona come un setaccio molecolare, tu conoscendo il peso molecolare della tua proteina ti puoi prendere uno di questi concentratori e arrivare al volume che vuoi! |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 03 giugno 2010 : 09:58:32
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| ah giusto, ha ragione Morfeo!!! li uso anche io, servono sia per dializzare che per concentrare in un solo passaggio. li ho usati un paio di volte senza perdere nemmeno un microgrammo di proteina!!! |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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mari82
Nuovo Arrivato
22 Messaggi |
Inserito il - 03 giugno 2010 : 11:01:34
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Devo fare un semplice Western... chi vende questi concentratori?
Grazie mille x l'aiuto! |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 03 giugno 2010 : 12:14:09
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millipore. si chiamano centricon e hanno membrane di grandezza variabile
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 03 giugno 2010 : 15:02:13
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| ma se è per un w.b. secondo me ti basta la precipitazione (io usavo acetone/metanolo 1:1) poi guarda un pò te... |
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cami
Utente Junior
Città: roma
136 Messaggi |
Inserito il - 03 giugno 2010 : 17:34:35
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| per concentrare le proteine per il wb io usavo 90% di acetone, per 20 minuti a -20°C, poi una centrifugata di 10 minuti a 3700 rpm che fa precipitare le proteine, alla fine buttavo il surnatante, facevo asciugare i campioni nella speedvac e li risospendevo con acqua e loading buffer.. |
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Morfeo
Nuovo Arrivato
Città: Roma
110 Messaggi |
Inserito il - 03 giugno 2010 : 17:36:26
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Io li uso sempre, sia per concentrare i campioni per il w.b. sia per concentrare le frazioni di eluizione delle cromatografie, precipitare con l'acetone non penso sia una ottima idea se poi ti serve fare ad esempio saggi di attività della proteina e quant'altro.. dipende se ti serve solo vederla o averla anche che funziona  |
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sgrencino
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 15 febbraio 2011 : 10:51:34
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raga..non è sapreste consigliarmi qualcosina perconcentrare le proteine..purtroppo non dispongo di un rotore ad angolo variabile per poter utilizzare i concentratori della millipore, ne lo speed vacum.. .
Il sistema in acetone sembrerebbe interessante ma non avrei la possibilità dell'aciugatura... |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 16 febbraio 2011 : 20:17:58
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ma va benissimo una qualsiasi centrifuga d banco, non hai bisogno di un rotore particolare, basta che i tubi entrino negli alloggiamenti. una qualsiasi centrifuga con rotore che regge 13000 rpm è ok. i tubi della millipore di cui parlavo sopra sono grandi, più o meno, come un eppendorf da 2 ml.
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sgrencino
Nuovo Arrivato
18 Messaggi |
Inserito il - 12 aprile 2011 : 09:30:48
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| confermo la bontà dei filtri, ma tieni conto che concentrano solo 17 volte, sto provando la precipitazione in acetone ma ho problemi nel risospendere il pellet... :( consigli?? |
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Discussione |
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Concentrare un campione proteico...si può?
Didattica e Relazioni
