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superilala
Nuovo Arrivato


Città: Rotterdam


30 Messaggi

Inserito il - 30 giugno 2010 : 11:58:16  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di superilala Invia a superilala un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti!
Dovrei usare il FACS per la prima volta..ho seguito un corso e mi hanno spiegato come usare la macchina...tutto bello e molto fico ma..per la preparazione del campione come mi regolo? Devo risospendere le cellule in PBS o va bene se le risospendo nel terreno? Quello che voglio vedere e' l'espressione di una proteina fusa alla GFP..devo preparare un bianco (cellule non trasfettate con la GFP)?

Grazie a tutti!

Dionysos
Moderatore

D

Città: Heidelberg


1913 Messaggi

Inserito il - 30 giugno 2010 : 18:24:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di Dionysos  Clicca per vedere l'indirizzo MSN di Dionysos Invia a Dionysos un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Strano che non ti abbiano insegnato come organizzare una lettura!

Le cellule devono essere innanzitutto lavate dal terreno e dal siero (almeno un wash in PBS)
e risospese in una soluzione di PBS che può contenere anche una piccola percentuale di siero,
magari un 2%, per favorire la sopravvivenza delle cellule. Puoi tenerle in ghiaccio.

Se non devi fare nessuna marcatura ma devi solo leggere la GFP, l'unico campione che ti
serve per settare correttamente i voltaggi è un campione di cellule identiche a quelle
che devi analizzare (quindi con lo stesso amount di autofluorescenza) ma senza GFP,
quindi non transfettate/trasdotte.

Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)

Less Jim Morrison, more Sean Morrison!


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superilala
Nuovo Arrivato


Città: Rotterdam


30 Messaggi

Inserito il - 02 luglio 2010 : 11:56:21  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di superilala Invia a superilala un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Grazie..provero' in questo modo!


..speriamo funzioni!
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