studio metilazione del DNA_ tecniche con bisolfito e altre

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silvietta82
Utente Junior

126 Messaggi

Inserito il - 08 luglio 2010 : 20:06:40

Ciao a tutti, quancuno mi sa spiegare in modo chiaro le tecniche di BS-seq e MethylC-seq? Ho bisogno di informazioni chiare sulle metodiche per studiare il metiloma genome-wide e lo stato di metilazione di singoli promotori di interesse in cellule di mammifero. Inoltre: sapete se esistono e come funzionano i microarray per determinare lo stato di metilazione del DNA?
Help, ho poco tempo e su internet non ho trovato molto...cercasi anche link utili a riguardo
Grazie anticipatamente

hagi88
Nuovo Arrivato

2 Messaggi

Inserito il - 12 luglio 2010 : 11:59:21

Per quanto riguarda la tecnica del bisolfito � stata messa a punto per superare un problema inerente all'amplificazione PCR di sequenza metilate.
Ovviamente l'amplificazione porta a una perdita della metilazione in quanto vengono incluse citosine non metilate dalla taq polimerasi.
Per questo motivo per distinguere le citosine metilate da quelle non metilate sul frammento di origine si aggiunge il bisolfito che reagisce con tutte le citosine non metilate trasformandole in uracile mentre non reagisce con le citosine metilate che rimangono citosine
Andando a sequenziare il filamento amplificato sar� quindi possibile distinguere le citosine metilate sulla sequenza di origine (citosine) da quelle non metilate (uracile).
Spero di non essere stato troppo confuso...
:)