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giulella
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
 Inserito il - 15 settembre 2010 : 13:58:03
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Ciao a tutti,
avrei una curiosità:
perchè quando si trasfettano le cellule con la lipofectamina bisogna usare il mezzo senza antibiotici? So che l'assenza di antibiotici riduce la morte cellulare, ma perchè?
Grazie a tutti 
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Gst
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Ariccia
143 Messaggi |
Inserito il - 15 settembre 2010 : 21:25:52
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| aggiungo un quesito a quello appena fatto: in molti trasfettano le cell con lipofectam in terreno senza antibiotico e senza siero (componenti del siero potrebbero interferire con la formazione dei liposomi)... altri non sono d'accordo. e voi? |
Ascoltami con gli occhi... |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 15 settembre 2010 : 22:56:03
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la mia prima trasfezione l'ho fatta con lipofec in presenza di siero e non si è trasfettato un bel niente!!! quindi sono d'accordo: no siero! gli antibiotici riducono molto l'efficienza di trasfezione, è scritto su ogni datasheet di trasfettante. in realtà più che ridurre l'efficienza ciò che si riduce è la formazione dei complessi liposomi-DNA/RNA. le cellule in genere tollerano bene gli antibiotici, io non vedo sofferenza cellulare in presenza di ab (più comunemente pen/strep)errata corrige: ignora la frase precedente, non avevo letto bene la tua domanda.. logicamente questo è tutto a svantaggio della sterilità perchè in assenza di ab il medium si inquinerà più facilmente. un buon compromesso è quello di usare l'optimem, terreno ad hoc per le trasfezioni, e rimettere medium completo (quindi CON siero ed antibiotici) dopo qualche ora dall'inizio della trasfezione.
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...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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giulella
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 16 settembre 2010 : 15:34:30
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Grazie mille per la risposta.
In realtà credevo che la presenza di antibiotici determinasse un aumento della morte cellulare (è quello che mi è capitato all'inizio quando usavo un mezzo con antibiotici). Parlandone poi mi avevano detto che i liposomi favorissero l'ingresso degli antibiotici nella cellula e ne determinassero la morte...sinceramente pero' mi sembra un po' strano...
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Gst
Utente Junior
Prov.: Roma
Città: Ariccia
143 Messaggi |
Inserito il - 16 settembre 2010 : 20:43:57
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CiaoIside.. scusa se approfitto della tua disponibilità
per caso sai anche perchè non va usato il siero?
Per quanto riguarda l'uso di ab io so come te :) |
Ascoltami con gli occhi... |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 16 settembre 2010 : 23:48:21
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ma non sarà semplicemente che se metti un antibiotico per cui la cellula non è ancora resistente (perchè il DNA non è stato ancora trasfettato/integrato) le cellule ti muoiono e basta. Premetto che ho poca esperienza di trasfezioni su cellule, però ricordo che l'antibiotico veniva messo dopo, prima si dava il tempo alle cellule di acquisire la resistenza, poi le si seleziona da quelle che non hanno integrato/trasfettato il plasmide (e le selezioniamo con l'antibiotico).
Se ci pensate si fa la stessa cosa con i batteri, quando li trasformiamo (anche se i tempi sono molto più brevi, questione di un'oretta due al massimo). |
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giulella
Nuovo Arrivato
38 Messaggi |
Inserito il - 17 settembre 2010 : 09:22:25
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Ciao SpemannOrganizer e grazie per la risposta.
n realtà io mi riferisco a trasfezione con shRNA e non con DNA esogeno che deve essere integrato. |
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antibiotici&trasfezione
Didattica e Relazioni
