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GFAP
Nuovo Arrivato

18 Messaggi

Inserito il - 19 settembre 2010 : 23:49:37

Salve a tutti.

Ho un problema con il trasferimento. Io uso la cameretta invitrogen e metto due gels contemporaneamente a 200mA per due ore a 4C.
Si verifica che sulla mia PVDF che si trova dietro si stampano le proteine del gels davanti. E' come se le proteine trapassassero tutto e arrivassero alla seconda PVDF. Cosi ho una PVDF con le proteine di entrambi i gels!!
Devo abbessare l'amperggio? Diminuire il tempo?

Aiuto, grazie

domi84
Moderatore

Città: Glasgow

1724 Messaggi

Inserito il - 20 settembre 2010 : 00:16:34

Mah...mi sembra alquanto insolito...
Le tue proteine escono dal gel, attraversano il PVDF (che dovrebbe essere non attraversabile dalle proteine) superano la spugna, entrano in soluzione, e poi arrivano sull'altra membrana di PVDF...dal lato opposto?!?
Non è che l'errore sta da qualche altra parte? Fai bene i sandwich del western? La polarità è corretta?

Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...

support_biomatica_it
Nuovo Arrivato

5 Messaggi

Inserito il - 27 settembre 2010 : 20:53:00

Sicuramente occorre controllare la corretta attivazione della membrana, il sandwich, il buffer di trasporto. Anche il tempo di corsa può essere un parametro da modificare
Comunque recentemente invitrogen ha messo sul mercato I-Blot che consente trasferimenti a secco in poco tempo

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