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Holland
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
 Inserito il - 07 ottobre 2010 : 15:41:24
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Qualcuno mi puo' spiegare per favore come fare la compensazione? Ho un protocollo in cui mi viene spiegato come prepare le mie compensation beads, e supponiamo che abbia il mio campione di sangue in cui voglio individuare CD4/CD25/CD127....come procedo? devo preparare i miei 4 tubi, uno negativo e uno per ogni anticorpo, so che devo prima aggiustare soglia, fsc e ssc del mio campione (acquisire senza salvare) e ora acquisire le beads, poi? mi servirebbe una descrizione un po' dettagliata se possibile perche' dopo mi sono persa ieri e non sono riuscita veramente ad andare avanti.. ah uso FACS CANTO II con FACS DIVA. Grazie.
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Holland
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2010 : 18:35:06
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| sono riuscita a chiarire i miei dubbi, presto posto la risposta alla mia domanda, cosi' se dovesse tornare utile a qualcuno.. |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 23 ottobre 2010 : 22:14:40
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Leggo ora il tuo post: il punto è che non è possibile risponderti
perchè non hai indicato i colori dei rispettivi anticorpi.
A seconda dei fluorocromi coniugati, infatti, scegli se preparare
o meno le corrispondenti biglie di compensazione. La procedura in sé
poi è stupidissima (metti una goccia di compbeads e una di compbeads
controllo negativo, ci aggiungi una quantità a casaccio di Ab ed è
finita lì). Il difficile è capire come e perchè tu la debba fare.
Se indichi i colori ti posso rispondere più dettagliatamente.
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Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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Holland
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
Inserito il - 28 ottobre 2010 : 23:58:44
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Caro Dionysos,
grazie mille, vedo anche io ora la tua risposta, sarebbe molto utile se mi potessi rispondere, perche ho effettivamente imparato a fare questa compensazione che come dici tu non è affatto difficile, ma non sono ancora soddisfatta dei risultati che ottengo, trovo difficile "giocare" coi voltaggi e impostarli in modo che i dot plots risultino abbastanza belli.
Allora la combinazione è la seguente
CD4 Apccy7- CD 25 PE - CD 127 Fitc
questo è solo un esempio perchè ho un protocollo in cui dovrei usare fino a 4 colori diversi, per diversi tipi di combinazioni di anticorpi.. usando tra i fluorocromi anche APC, PECy5, Percp... come posso fare a ottenere belle immagini? e soprattutto buoni risultati?
Grazie in anticipo di nuovo
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Holland
Nuovo Arrivato
23 Messaggi |
Inserito il - 18 novembre 2010 : 23:47:48
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Non mi hai piu risposto 
e tra l'altro sono di nuovo in crisi io e il mio rapporto problematico con il citofluorimetro.... |
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compensation controls in citofluorimetria
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