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paolo865
Utente Junior
Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco
262 Messaggi |
 Inserito il - 27 ottobre 2010 : 20:50:39
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ciao, oggi ci siamo accorti in lab che il TBS con cui prepariamo le soluzioni per gli anticorpi e per i lavaggi dei blot invece di essere a pH 8 era a pH 10, in quanto qualcuno ha sbagliato a pHare la madre di Tris-HCl!!! Visto che ho avuto una serie di problemi ultimamente con gli sviluppi dei blot e soprattutto dopo lo strippaggio delle membrane sembrava che staccavo anche parte delle proteine trasferite dalla membrana (lo sviluppo fatto con gli stessi anticorpi il giorno dopo dava un segnale nettamente inferiore), secondo voi può essere causa del pH?
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_pietro_
Nuovo Arrivato
Città: Lund
104 Messaggi |
Inserito il - 27 ottobre 2010 : 21:33:17
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Beh, io non ho il quadro completo della situazione, ma se tu dici che il TBS e' l'unica cosa diversa relativamente a come di solito lavori, non vedo alternative, dev'essere il pH del TBS.
Per quanto riguarda lo stripping, devi mettere in conto che ogni volta che strippi, una quota di proteine la perdi. C'e' pure gente che argomenterebbe contro la visualizzazione dell'housekeeping dopo lo strippaggio, figurati. Non saprei nemmeno se escludere che il pH alto del TBS abbia indebolito il legame delle tue proteine alla membrana. Anche se il pH del blotting buffer e' giá di suo altino (il mio ad esempio si aggira tra 8,8 e 9).
Fai sapere se recuperato il TBS recuperi anche tutto il sistema, OK? 
PS_ Complimentoni al genio che ha pHto il Tris-Cl  . E' proprio per questo che non delego mai il mio lavoro |
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