Fluo-4 e ionomicina!

Forum

Registrati Discussioni Recenti Preferiti Utenti Cerca Regolamento RSS Statistiche

Utilità

I libri
consigliati:

Chimica e propedeutica biochimica. Con CD-ROM
Luciano Binaglia, Bruno Giardina

Dizionario di biologia
Autori Vari

Genetica molecolare
Rolf Knippers

Altri Libri

Nome Utente:	Password:
Riconoscimi automaticamente

Tutti i Forum

MolecularLab

Fisiologia

Fluo-4 e ionomicina!

Nuova Discussione

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Link veloci:

Siti Scientifici

Protocolli Laboratorio

Glossario

Didattica e Principi

Multimedia

Aggiungi i tag

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Autore

Discussione

Ilarynmf90
Nuovo Arrivato

37 Messaggi

Inserito il - 10 novembre 2010 : 21:24:42

ciao, sapreste spiegarmi la tecnica per visualizzare la concentrazione di calcio intracellulare con uso di fluo-4? in particolare vorrei sapere nel caso del trattamento con ionomicina (che permette l'ingresso di calcio extrac.)come si fa a determinare la concentrazione di fluo 4 da inserire in modo che tutto il calcio che si trova nella cellula sia legato?
grazie

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 11 novembre 2010 : 08:49:44

Citazione:
come si fa a determinare la concentrazione di fluo 4 da inserire in modo che tutto il calcio che si trova nella cellula sia legato?

Semplicemente non lo fai! Non vuoi assolutamente inserire tutto quel fluo-4 (ovviamente ci� vale per qualsiasi altro indicatore), l'importante per calibrare l'esperimento (immagino sia per questo che usi la ionomicina) � di sapere la fluorescenza -o la ratio nel caso di indicatori ratiometrici- a concentrazione saturante e concentrazione nulla di Ca2+.

La concentrazione di indicatore deve essere la stessa che durante gli esperimenti veri e propri, altrimenti non puoi comparare i risultati. In generale diminuire la concentrazione di indicatore � positivo per la salute delle cellule (ma ovviamente non puoi diminuire troppo altrimenti non vedi pi� la fluorescenza!)

Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui

My photo portfolio (now on G+!)

Ilarynmf90
Nuovo Arrivato

37 Messaggi

Inserito il - 11 novembre 2010 : 18:50:15

ma se permetto l'ingresso di Ca2+ dall'ambiente extracellulare non rischio di avere Ca2+ in eccesso che non si lega a fluo-4 (perch� ormai saturato)? in questo caso non riuscirei a risalire all'esatta concentrazione di Ca2+... correggimi se sbaglio e grazie per la risposta!

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 11 novembre 2010 : 19:13:25

Beh, ci saranno sempre delle molecole di calcio non legate all'indicatore. Se fossero tutte legate all'indicatore la cellula non avrebbe pi� calcio disponibile per funzionare!

La fluorescenza dell'indicatore � PROPORZIONALE alla concentrazione di Ca2+.

E' poi chiaro che il range di calcio che puoi analizzare con un certo indicatore dipende dalla sua Kd per il calcio. Se hai una Kd bassa puoi analizzare [Ca2+] pi� elevate (ma perderai "risoluzione" alle basse concentrazioni) e viceversa.

Il Fluo-4 ha una Kd di ~350nM, e pu� essere senza problemi utilizzato nel range 100nM-1uM

Sei un nuovo arrivato?
Leggi il regolamento del forum e presentati qui

My photo portfolio (now on G+!)

Discussione

Quanto � utile/interessante questa discussione:

Nuova Discussione

Rispondi

Aggiungi ai Preferiti

Cerca nelle discussioni

Vai a:

MolecularLab.it

Android e Mobile



Scarica le app! Ora anche sul tuo smartphone!

Ciao Login - Iscriviti



Visitatori: 426

Novità
Protocolli di laboratorio: reagenti e tecniche usate in laboratorio biomedico e molecolare.