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smile105
Nuovo Arrivato


Città: Napoli


29 Messaggi
Inserito il - 10 dicembre 2010 : 18:02:40  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di smile105 Invia a smile105 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Salve a tutti!
Qualche giorno fa ho fatto un esperimento di immunoprecipitazione con un anticorpo e poi rivelato mediante WB con un altro...La proteina di mio interesse però è di 50 KDa, quindi allo stesso peso delle IgG! Per questo motivo non sono riuscita a vedere il segnale che mi interessava!
Esiste un modo per eliminare le IgG?
Grazie mille!
Giusy

AleXo
Moderatore

OrniAle

Prov.: Estero
Città: San Francisco, California


1550 Messaggi
Inserito il - 10 dicembre 2010 : 19:02:31  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AleXo  Invia a AleXo un messaggio AOL Invia a AleXo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
una IgG non ridotta e' 150kd
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smile105
Nuovo Arrivato


Città: Napoli


29 Messaggi
Inserito il - 10 dicembre 2010 : 20:09:25  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di smile105 Invia a smile105 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
In che senso non ridotta?
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AleXo
Moderatore

OrniAle

Prov.: Estero
Città: San Francisco, California


1550 Messaggi
Inserito il - 10 dicembre 2010 : 22:25:29  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AleXo  Invia a AleXo un messaggio AOL Invia a AleXo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
se fai correre il gel in condizioni non riducenti, altrimenti dividi le catene leggere (25kd) da quelle pesanti (50kd).
Anyway, non mi e' chiaro perche'cosa vedi/non vedi in WB.
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smile105
Nuovo Arrivato


Città: Napoli


29 Messaggi
Inserito il - 10 dicembre 2010 : 23:27:34  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di smile105 Invia a smile105 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
Infatti ho fatto la corsa in condizioni denaturanti!!!
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AleXo
Moderatore

OrniAle

Prov.: Estero
Città: San Francisco, California


1550 Messaggi
Inserito il - 10 dicembre 2010 : 23:54:44  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di AleXo  Invia a AleXo un messaggio AOL Invia a AleXo un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
continuo a non capire perche' la presenza dell'heavy chain dovrebbe darti problemi in WB.

in sds-page sei sempre in condizioni denaturanti, ma non per forza riducenti.
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domi84
Moderatore

Smile3D

Città: Glasgow


1724 Messaggi
Inserito il - 11 dicembre 2010 : 00:26:53  Mostra Profilo  Visita l'Homepage di domi84 Invia a domi84 un Messaggio Privato  Rispondi Quotando
dovresti usare un anticorpo fatto in mouse per l'Ip e uno fatto in rabbit per il WB, così non avresti questo problema. Non hai questa possibilità?
Il mio blog: http://domi84.blogspot.com/
Le foto che ho scattato...
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