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suestrela
Nuovo Arrivato
Città: terra
5 Messaggi |
 Inserito il - 13 dicembre 2010 : 12:20:00
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Ciao, ho una domanda urgentissima: devo usare fluorocromi tandem (es PerCp-Cy5.5, APC-AlexaFluor780), in citofluorimetria, su cellule fissate in paraformaldeide, ma mi hanno detto che la para rompe i tandem (tranne PerCp-Cy5.5), lasciando legato alle cellule solo il primo fluorocromo. Ne sapete qualcosa?
grazie mille per qualsiasi aiuto!!
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 13 dicembre 2010 : 15:01:10
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Nella mia esperienza non è affatto così.
Su cellule PFA-fixed faccio analisi citofluorimetriche
con tandem simili a quelli che dici tu (APC-eFluor780,
PerCPCy5.5 ed efluor710, PE-Cy7) e non ho mai avuto
problemi di rottura del tandem. Se il tandem si spezza
è perchè l'anticorpo è vecchio o di bassa qualità. |
Volere libera : questa é la vera dottrina della volontà e della libertà
(F.W. Nietzsche)
Less Jim Morrison, more Sean Morrison!
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 13 dicembre 2010 : 23:49:44
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| Sai che invece a me è venuto il dubbio che possa succedere? L'ho visto nel momento in cui ho provato a fare un multicolor staining di membrana, usando anche un Ab coniugato PE-Cy7, per poi marcare con il Ki67-HorizonV450 e infine PI. Dovendo fissare in EtOH (che estrae antigeni dalla membrana) ho fatto una prefissazione con la PFA dopo la marcatura di superficie. Pur lasciando libere le FL2 e 3 per il PI ho buttato via una giornata di lavoro perchè l'emissione del PI era sballatissima e incompensabile. Ab nuovo e della BD (se si può dire) quindi non penso sia un problema di anticorpo |
Doctors are men who prescribe medicines of which they know little, to cure diseases of which they know less, in human beings of whom they know nothing (Voltaire) |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 14 dicembre 2010 : 16:54:22
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La chimica dei tandem è diversa per ogni ditta: può darsi che
alcune quelli di alcune ditte non resisteno alla PFA. Non lo so.
So solo che con coniugati della BD e della eBioscience non
mi è MAI accaduto (e parliamo di decine di esperimenti, visto
che io fisso sempre con PFA per il tipo di assay che faccio) |
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la_fra
Utente
750 Messaggi |
Inserito il - 14 dicembre 2010 : 21:05:47
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il mio è della BD, come ho scritto sopra
magari si nota di più nello staining del PI dato che si acquisisce in lineare anzichè in logaritmica, sta di fatto che la volta successiva senza PE-Cy7 il segnale era pulito
cmq ho trovato scritto che PUO' esserci questo problema, specialmente con il PE-Cy7 e l'APC-Cy7. Non riesco a caricare il documento perchè in questo momento ho problemi di connessione sorry |
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Dionysos
Moderatore
Città: Heidelberg
1913 Messaggi |
Inserito il - 14 dicembre 2010 : 22:37:18
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Io lo vedo con i singoli: quando tenti di compensare i singoli
fluorocromi (per esempio PECy7 o APCCy7) con i rispettivi colori
senza tandem (rispettivamente il canale di PE e di APC) vedi un
certo numero di eventi che sono incompensabili, cioè stanno sulla
esatta diagonale. In base a quanti eventi di quel tipo mi compaiono
io valuto se il tandem si stacca o meno. Non so per il PI, però sì ,
immagino che con il lineare tutti i problemi si amplifichino.... |
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citofluorimetria: fluorocromi tandem e paraformaldeide
Didattica e Relazioni
