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roselady
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
119 Messaggi |
 Inserito il - 15 dicembre 2010 : 19:08:37
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Ragazzi c'è un motivo particolare per cui l'immunoprecipitazione si fa a 4°C ??? e perchè è cosi anche x la centrifugazione???
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roselady
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
119 Messaggi |
Inserito il - 15 dicembre 2010 : 19:15:55
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| Ragazzi scusate ancora,inoltre perchè per fare il western blotting si ricorre ad un sds page???? vi chiedo scusa ma tra due giorni devo fare la discussione sulla tesina dei tre anni e mi stanno venedo tanti dubbi :( |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 15 dicembre 2010 : 19:42:02
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a 4°C i processi enzimatici sono tutti bloccati quindi non rischi di degradare le proteine. Per la seconda domanda, il western lo puoi fare con un'elettroforesi in condizioni native, dipende da che tipo di esperimento fai. l'elettroforesi in condizioni denaturanti (ovvero l'sds page) ti consente di separare le proteine solo in base al loro PM. Cito da wikipedia: "Il principio su cui si basa questa tecnica è l'attività denaturante dell'SDS; questo è in grado di interagire con le proteine in un rapporto costante 1.4g SDS ogni g di proteina. La separazione avviene quindi per differenza fra pesi molecolari visto che il rapporto massa carica per ogni proteina denaturata con SDS rimane costante."
Poichè questo sono concetti base e non devono essere noti solo a chi frequenta un laboratorio, la cosa migliore sarebbe quella di fare una rapida ricerca per chiarirti i dubbi. Per questo wikipedia è chiaro, conciso ed esauriente.  |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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paolo865
Utente Junior
Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco
262 Messaggi |
Inserito il - 15 dicembre 2010 : 19:42:35
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| si conduce un immunoprecipitazione a 4°C per preservare l'integrità dell'anticorpo...tieni conto che spesso si opera a 4°C solo se si fa un'incubazione o/n, altrimenti per molti anticorpi (almeno per la mia esperienza personale) puoi lavorare benissimo anche a RT. Fai un sds-page prima del wb per separare le tue proteine sulla base del rapporto massa/carica e quindi, dopo il trasferimento, averle in forma denaturata sulla membrana in modo che gli epitopi siano esposti all'immunoriconoscimento da aprte dell'anticorpo che usi poi in analisi di western blot. |
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 15 dicembre 2010 : 21:31:45
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| piu' che bloccati i processi enzimatici a 4°C sono molto rallentati. Confermo comunque che la T bassa serve a garantire preservazione anticorpo/antigeni, quindi delle proteine in gioco. |
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paolo865
Utente Junior
Prov.: Como
Città: Olgiate Comasco
262 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2010 : 13:00:40
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| scusa ma forse per la fretta mi sono spiegato male e sembra che ti abbia detto che in SDS-page le praoteine si separano sulla base del loro rapporto massa carica, ma noon è così, le proteina in sds-page si separano solo per la loro massa molecolare (e non peso come spesso, ma scorrettamente, usiamo dire) |
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roselady
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: napoli
119 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2010 : 14:32:50
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Vi ringrazio tantissimo siete stati esaustivi al massimo *____*
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Perchè una temperatura cosi bassa?
Didattica e Relazioni
