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anselmo
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 Inserito il - 21 febbraio 2011 : 16:27:48
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Inizio con il dire che utilizzo un apparecchio per SSCP da quasi tre anni e ho una certa esperienza a riguardo.
Nell'ultimo mese ho riscontrato dei problemi che non si erano mai verificati prima: in parole povere, sviluppando il gel, si vanno a formare delle bande deboli e poco risolute, i DNA mutanti hanno un pattern di corsa indistinguibile dal WT, i tempi di colorazione si sono dilatati notevolmente.
I DNA sono buoni, le PCR vengono controllate su gel d'agarosio e la luminosità del segnale è medio/alta, un tempo con meno DNA riuscivo a tirar fuori lo stesso dei risultati validi, ora pur caricando tutto il pozzetto con la massima quantità di DNA possibile i risultati sono scadenti.
Le soluzioni per il lavaggio sono state preparate più volte, come la soluzione di acrilamide madre e quella che si usa per preparare il gel (la 30% e la 6%).
Come controllo colorazione e risoluzione sono stati usati marker da 100-200-300 ecc bp e.....vengono PERFETTAMENTE a differenza dei geni.
Questa è una richiesta disperata perchè oltre ad una esperienza di almeno 400 SSCP alle spalle, le abbiamo pensate veramente tutte...grazie!
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