Salve a tutti, vi pongo un quesito che in rete non sono riuscito a risolvere a proposito del disegno delle sonde taqman per la quantificazione di alcune tipologie microbiche mediante dna genomico. E' necessario nel disegno della sonda introdurre in 5'una base non complementare al templato dopo il reporter ed una in 3'terminale che crea un mismatch prima del quencher? inoltre la scelta dei fluorocromi viene dettata da qualche principio oltre che dal canale di lettura del termociclatore? Vi ringrazio per la collaborazione