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ilabest
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8 Messaggi |
 Inserito il - 23 marzo 2011 : 17:35:51
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Ciao a tutti!
Avrei bisogno di un consiglio su come impostare al meglio un protocollo di Long Range. Devo amplificare frammenti di 10Kb, 15Kb e 18Kb. Utilizzando il kit Takara LA Taq, sono riuscita ad amplificare il frammento da 10Kb, ma non gli altri due.
Quindi mi sono focalizzata sul frammento da 15Kb, ho giocato sulla Temperatura di Annealing (Tm dei primer è 59.9°C circa), sull'elongation aumentandola a 18' invece di 15', ma il risultato è sempre uno smirn aspecifico, che sembra accumularsi maggiormente nell'altezza di mio interesse, ma è comunque uno smirn e non una banda..
Da cosa può dipendere il fatto che non si formi l'amplificato?
Grazie!!!
Ilaria 
Ps: vorrei precisare che sto lavorando su DNA genomico
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