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Autore

Discussione

mollichina di pane
Utente Junior

121 Messaggi

Inserito il - 23 marzo 2011 : 18:08:45

Ciao a tutti!
Avrei bisogno di un aiuto...
...devo fare un western blot su frazioni cellulari (citoplasma-nucleo) per verificare la localizzazione della proteina d'interesse. Per questo motivo ho un controllo per il citoplasma ed uno per il nucleo.
Purtroppo non ho un protocollo che mi spieghi come si fa questo tipo di western. Mi spiego meglio: per es. per la frazione citoplasmatica avr� un anticorpo per il controllo ed uno per la prot. d'interesse. Vanno usati insieme? oppure bisogna "strippare"?
Qualcuno di voi mi sa indicare un protocollo o un articolo?
Grazie mille!!!

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 23 marzo 2011 : 18:39:47

dipende. se le due bande sono sufficientemente distanti puoi tagliare la membrana e non hai bisogno di strippare.

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theBiochemist
Nuovo Arrivato

Prov.: UK
Citt�: Leicester

14 Messaggi

Inserito il - 24 marzo 2011 : 02:56:21

Se avete l'Odyssey, puoi utilizzare piu' anticorpi allo stesso momento senza tagliare o strippare. Io ne ho messi 4 al massimo, ma ho visto farlo con 8.

http://www.icmb.utexas.edu/core/DNA/Information_Sheets/Odyssey/Western_07737.pdf

http://www.icmb.utexas.edu/core/DNA/Imaging/Odyssey.htm

Iside
Utente Attivo

Citt�: Napoli

1375 Messaggi

Inserito il - 24 marzo 2011 : 10:36:13

curiosit�: che marcatore di nucleo usi?

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...

mollichina di pane
Utente Junior

121 Messaggi

Inserito il - 29 marzo 2011 : 11:46:44

Grazie a tutti!
Prover� la via pi� semplice di chick80 e nel frattempo ho scovato un articolo carino (richiesto in biblio perch� non � tra le riviste nella nostra rete)che magari prover� pi� in l� sull'utilizzo di pi� Ab contemporaneamente.
Il marcatore per il nucleo?
o SNRP70 o nuclear marker-nuclear matrix protein p84

ericuccia88
Nuovo Arrivato

19 Messaggi

Inserito il - 12 dicembre 2011 : 21:45:17

Ciao a tutti!
sono nuova, mi sono iscritta oggi!!
Volevo chiedervi se potete suggerirmi un marcatore citoplasmatico per western blot su frazioni cellulari che non sia l'actina!
grazie!!

knodel
Nuovo Arrivato

24 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2011 : 20:30:13

La GADPH!

Daria85
Utente

678 Messaggi

Inserito il - 16 dicembre 2011 : 09:48:25

anche la tubulina se vuoi, pesa circa 55KDa

pokypsi
Nuovo Arrivato

20 Messaggi

Inserito il - 20 dicembre 2011 : 13:18:40

in teoria se usi marcatori specifici il tuo marcatore citoplasmatico non dovresti averlo nel nucleo e viceversa. io di solito li faccio uno dopo l�altro, facendo quello prima nucleare che di solito � pi� specifico eppoi quello citoplasmatico. Per esempio il GAPDH un p� va anche nel nucleo quindi � meglio farlo per secondo.