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mollichina di pane
Utente Junior
121 Messaggi |
 Inserito il - 23 marzo 2011 : 18:08:45
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Ciao a tutti!
Avrei bisogno di un aiuto...
...devo fare un western blot su frazioni cellulari (citoplasma-nucleo) per verificare la localizzazione della proteina d'interesse. Per questo motivo ho un controllo per il citoplasma ed uno per il nucleo.
Purtroppo non ho un protocollo che mi spieghi come si fa questo tipo di western. Mi spiego meglio: per es. per la frazione citoplasmatica avrò un anticorpo per il controllo ed uno per la prot. d'interesse. Vanno usati insieme? oppure bisogna "strippare"?
Qualcuno di voi mi sa indicare un protocollo o un articolo?
Grazie mille!!!
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 23 marzo 2011 : 18:39:47
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| dipende. se le due bande sono sufficientemente distanti puoi tagliare la membrana e non hai bisogno di strippare. |
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theBiochemist
Nuovo Arrivato
Prov.: UK
Città: Leicester
14 Messaggi |
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Iside
Utente Attivo
Città: Napoli
1375 Messaggi |
Inserito il - 24 marzo 2011 : 10:36:13
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| curiosità: che marcatore di nucleo usi? |
...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...
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mollichina di pane
Utente Junior
121 Messaggi |
Inserito il - 29 marzo 2011 : 11:46:44
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Grazie a tutti!
Proverò la via più semplice di chick80 e nel frattempo ho scovato un articolo carino (richiesto in biblio perchè non è tra le riviste nella nostra rete)che magari proverò più in là sull'utilizzo di più Ab contemporaneamente.
Il marcatore per il nucleo?
o SNRP70 o nuclear marker-nuclear matrix protein p84
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ericuccia88
Nuovo Arrivato
19 Messaggi |
 Inserito il - 12 dicembre 2011 : 21:45:17
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Ciao a tutti!
sono nuova, mi sono iscritta oggi!!
Volevo chiedervi se potete suggerirmi un marcatore citoplasmatico per western blot su frazioni cellulari che non sia l'actina!
grazie!! |
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knodel
Nuovo Arrivato
24 Messaggi |
Inserito il - 15 dicembre 2011 : 20:30:13
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| La GADPH! |
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 16 dicembre 2011 : 09:48:25
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| anche la tubulina se vuoi, pesa circa 55KDa |
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pokypsi
Nuovo Arrivato
20 Messaggi |
Inserito il - 20 dicembre 2011 : 13:18:40
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| in teoria se usi marcatori specifici il tuo marcatore citoplasmatico non dovresti averlo nel nucleo e viceversa. io di solito li faccio uno dopo l´altro, facendo quello prima nucleare che di solito é piú specifico eppoi quello citoplasmatico. Per esempio il GAPDH un pó va anche nel nucleo quindi é meglio farlo per secondo. |
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Western blot
Didattica e Relazioni
