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biologina
Nuovo Arrivato
92 Messaggi |
 Inserito il - 12 aprile 2011 : 15:39:15
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a cosa serve la lysis buffer solution??....
ovvimente dopo aggiungo proteasi K se questa distrugge le membrane cellulari la prima che fa????
sto parlando di campioni di sangue!!!!
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theBiochemist
Nuovo Arrivato
Prov.: UK
Città: Leicester
14 Messaggi |
Inserito il - 14 aprile 2011 : 11:00:21
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Ciao.
le proteasi K non servono a distruggere la membrana, ma a digerire le proteine in essa contenute che 1) contaminerebbero il tuo DNA e 2) potrebbero degradarlo.
Il lysis buffer serve a distruggere la membrana. Generalmente contiene EDTA che serve a chelare i cationi necessari alle DNasi e denatura le proteine (normalmente tramite SDS, per E. coli). Infatti, le proteasi k non vengono denaturate dall'SDS e possono essere utilizzate nella stessa soluzione.
Nicola :) |
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biologina
Nuovo Arrivato
92 Messaggi |
Inserito il - 19 aprile 2011 : 16:06:46
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grazie nicola sei stato molto esauriente anche se ora ho un'altra domanda da porvi...
il protocollo che sto seguendo è quello delle Nucleospin.
La Buffer Blu ,la buffer 5 la buffer be sono utilizzate per i lavaggi ma cosa fanno esattamente che funzione svolgono?? |
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picchiasebino
Nuovo Arrivato
Città: roma
52 Messaggi |
Inserito il - 06 maggio 2011 : 14:16:26
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| Genaralmente sono lavaggi di purificazione dalle impurità varie come cloruro di guanidina (o cloroformio x denaturazione e allontanamento proteine) ed etanolo. |
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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
Inserito il - 20 maggio 2011 : 20:01:06
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| ovviamente se usi un kit i produttori eviteranno di dirti al 90% quello che c'è dentro al buffer!! meglio l'home made a volte! |
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