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Ilarynmf90
Nuovo Arrivato
37 Messaggi |
 Inserito il - 29 giugno 2011 : 12:13:30
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Ciao, sapreste spiegarmi in sintesi in cosa consiste il metodo tunel? So che si usa Tdt(terminal deossi-nucleotidil-trasferasi) e deossinucleotidil trifosfati fluorescenti a cui è poi aggiunta fosfatasi alcalina.qual'è la funzione della fosfatasi??
grazie
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bontix
Nuovo Arrivato
9 Messaggi |
Inserito il - 14 luglio 2011 : 04:59:20
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| Che ricordo io non si pone la fosfatasi. Dopo aver messo la tarminal transferasi e bromouracile (mi pare che sia questo il nucleotide che si usa per marcare) si tratta con un anticordpo contro il nucleotide stesso. Questo anticorpo a su volta pu'o essere usato come anticorpo primario o direttamente legato a un fluoroforo. Però io non ricordo il passaggio con fosfatasi. |
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elly_
Utente Junior
400 Messaggi |
Inserito il - 17 luglio 2011 : 20:58:59
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| esatto non c'è! |
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Archimedes
Nuovo Arrivato
Città: Boston, MA
20 Messaggi |
Inserito il - 28 luglio 2011 : 16:56:47
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Nessun passaggio di fosfatasi.... cmq scusa il ritardo ma è da un bel po che non entro qui :)
Il TUNEL (TdT mediato dUTP nick end labelling) è un saggio per rilevare apoptosi: Quando si innesca il processo apoptotico le caspasi "tagliano" il DNA e si vengono quindi a creare delle estremità 3'-OH che possono essere usate come substrato per la Tdt..
Praticamente questo enzima catalizza l'addizione di dUTP marcato all'estremità 3'-OH del DNA, rendendo visibili le popolazioni di cellule apoptotiche nel campione.
spero di essere stato il più chiaro e semplice possibile.. mi scuso ancora del ritardo.
Buona giornata
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 01 agosto 2011 : 19:52:23
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In realtà ci sono diverse modalità di rivelazione per la TUNEL. Se usi dUTP (generalmente è questo il nucleotide che si usa) marcato direttamente con un fluoroforo (per es., dUTP-Fluoresceina) è chiaro che nn ti serve nessun anticorpo per rivelare la presenza del nucleotide, giacchè ti basterà guardare la sua fluorescenza (data appunto dalla fluoresceina). Se invece utilizzi altri nucleotidi, come DIG-dUTP (marcato cioè con la digossigenina) o altri, allora ti servirà un anticorpo (per esempio anticorpo anti-dig). Questo anticorpo è (generalmente) un Fab coniugato con la fosfatasi alcalina, che viene sfruttata per una reazione cromogenica con un substrato apposito (per esempio, NBT/BCIP -> N.B.: anticorpo anti-dig e nbt/bcip sono reagenti usati anche nella in situ hybridization). Io ho usato entrambi questi sistemi per la TUNEL, credo comunque ve ne siano altri.
Saluti |
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