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francescofar
Nuovo Arrivato
45 Messaggi |
 Inserito il - 05 luglio 2011 : 15:37:00
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Salve a tutti spero mi possiate aiutare: non riesco a capire come dalla coniugazione batterica si è arrivati a mappare il cromosoma di e. coli
Qualcuno mi può spiegare un po'?
Grazie mille
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Ale_90
Utente Junior
296 Messaggi |
Inserito il - 05 luglio 2011 : 15:47:26
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Ti posto uno stralcio dei miei appunti di micro:
"si incrocia un ceppo Hfr, prototrofo per Thr, Leu, Lac e sensibile alla streptomicina, con un ceppo F- auxotrofo per Thr, Leu e Lac, ma resistente alla streptomicina, con un rapporto 10 a 1. Si piastra su terreni con composizioni differenti, quindi selettivi in maniera diversa, ad esempio un terreno minimo con streptomicina e glucosio per selezionare ricombinanti Thr+, Leu+, ed un terreno minimo con streptomicina, lattosio, treonina e leucina, per selezionare ricombinanti Lac+. Se si considerano più geni come in questo caso, è possibile stabilirne la posizione relativa in base al tempo con cui ogni gene viene trasferito dal ceppo Hfr al ceppo F-; si può così mappare la posizione di questi geni, ripetendo questo stesso incrocio e vortexando a tempi diversi, in modo da interrompere a tempi diversi la coniugazione, per poi piastrare su terreni agarizzati. Contando il numero di ricombinanti fratto il tempo, si può trovare l’ordine con cui vengono trasferiti i geni cromosomici, con precedenza ai geni più vicini all’origine di trasferimento OriT; con la crescita del tempo di appaiamento cresce il numero di ricombinanti. Il plateau dei marcatori di selezione è ad altezze diverse perché con l’aumentare del tempo aumenta anche la probabilità di rottura del pilo, riducendo il trasferimento dei geni più lontani da OriT; ne consegue che i geni più distanti da OriT verranno trasmessi ad un numero minore di ricombinanti. Anche la pendenza è diversa, poiché la sincronia delle cellule in coniugazione diminuisce con l’avanzare del tempo.
Questo esperimento ha dimostrato che la coniugazione è un processo sequenziale e polarizzato ed ha anche permesso di mappare il genoma di E. Coli, dove le distanza tra i geni sono espresse in minuti."
In sostanza, attraverso la coniugazione tra un ceppo Hfr e ceppi auxotrofi ogni volta diversi, a seconda del numero di ricombinanti ottenuti e della durata della coniugazione, è possibile stabilire quanto il gene necessario per annullare l'auxotrofia sia lontano dall'origine di replicazione OriT. Ti torna?
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francescofar
Nuovo Arrivato
45 Messaggi |
Inserito il - 05 luglio 2011 : 16:04:56
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| ok, grazie mille. Ma la coniugazione in questo caso tra Hfr e un F- è completa sempre o può anche non esserlo? |
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Ale_90
Utente Junior
296 Messaggi |
Inserito il - 05 luglio 2011 : 16:59:11
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| Non è mai completa, ma progressivamente aumenti il tempo di coniugazione, in modo da distanziarti dall'oriT |
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francescofar
Nuovo Arrivato
45 Messaggi |
Inserito il - 05 luglio 2011 : 18:25:09
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grazie mille sei stato chiarissimo e molto gentile
Ciao |
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coniugazione batterica e mappe fisiche del cromosoma e coli
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