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sasi2926
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3 Messaggi

Inserito il - 05 ottobre 2011 : 11:01:39

Ciao a tutti!!!Ho bisogno di voi..vi spiego il problema..l'altro giorno mi hanno dato due campioni x l'estrazione di rna da usare come controlli interni..i campioni consistevano in un pellet di leucociti risospesi in pbs e congelati al -80..ora..l'estrazione(con trisure) è venuta una schifo, la qualità dell'rna è bassa(1,1) e la b-globulina nella real-time esce tardi(22-23 ciclo, quando normalmente esce a 15-16; la mia domanda è..ma si possono congelare al -80 i leucociti per di più risospesi in PBS?!
e inoltre..quando poi li tiro fuori dal -80 a quanto li devo centrifugare e per quanto tempo?forse ha sbagliato questo passaggio e ho ottenuto un pellet troppo piccolo per avere una buona quantità di rna!
che dite..mi date una mano??grazie..

Iside
Utente Attivo

Città: Napoli

1375 Messaggi

Inserito il - 05 ottobre 2011 : 11:35:21

io non congelerei mai delle cellule in PBS. Non so se sia pratica comune per i leucociti, ma la formazione dei cristalli di ghiaccio in soluzione è garantita perchè il PBS non è assolutamente crioprotettivo.

...we're just two lost souls swimming in a fishbawl...year after year...

sasi2926
Nuovo Arrivato

3 Messaggi

Inserito il - 05 ottobre 2011 : 13:19:02

Si infatti..anch'io la penso come te..non congelerei mai le cellule in pbs..caso mai a secco..ma non in pbs..in giro per la rete non ho trovato nessuno che usasse questo metodo..
che mi consigliate?dico di darmi un nuovo pellet, questa volta però congelato direttamente in trisure?almeno è più sicuro..
un'altra domanda..di quanti leucociti,+ o -, ho bisigno per avere una buona resa di rna?
grazie..