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Roberto De Masi
Nuovo Arrivato
Prov.: Italy/Lecce/Puglia
Città: Casarano
4 Messaggi |
 Inserito il - 16 ottobre 2011 : 01:08:36
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ciao a tutti
lavoro su PBMC:
1)vorrei sapere come fare a "scioglire" le cell per estrarre le proteine da far correre per elettrof vertic in condiz denat.
2)secondo voi il mio anticorpo può riconoscere la prot anche se denaturata?
Aiuto
grazie
R.
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 16 ottobre 2011 : 08:02:36
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Citazione:
vorrei sapere come fare a "scioglire" le cell per estrarre le proteine da far correre per elettrof vertic in condiz denat.
Qualcosa del genere dovrebbe funzionare:
http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=11
Citazione:
secondo voi il mio anticorpo può riconoscere la prot anche se denaturata?
Se l'anticorpo è indicato come anticorpo per Western blot (guarda sul foglietto che arriva con l'anticorpo o sul sito internet del produttore) c'è una buona probabilità. Se invece non fosse indicato così, prova lo stesso perchè magari potrebbe funzionare! E' impossibile darti una risposta più precisa senza sapere esattamente che anticorpo usi. |
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 16 ottobre 2011 : 11:24:24
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io i PBMC li liso normalmente inRIPA Buffer + inibitori delle proteasi , consiste in una semplice lisi in ghiaccio per 30 min, seguita da una centrifugata dopo la quale si tiene il surnatante.
Per l'IG bisogna vedere se l'epitopo che riconosce è lineare o discontinuo, lo puoi vedere tranquillamente analizzando la sequenza FASTA.
baci
PS anchio lavoro su alcuni progetti di SM, ma mi occupo di molecole anti-infiammatorie. |
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