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Autore

Discussione

Roberto De Masi
Nuovo Arrivato

Prov.: Italy/Lecce/Puglia
Citt�: Casarano

4 Messaggi

Inserito il - 16 ottobre 2011 : 01:08:36

ciao a tutti
lavoro su PBMC:
1)vorrei sapere come fare a "scioglire" le cell per estrarre le proteine da far correre per elettrof vertic in condiz denat.
2)secondo voi il mio anticorpo pu� riconoscere la prot anche se denaturata?
Aiuto
grazie
R.

chick80
Moderatore

Citt�: Edinburgh

11491 Messaggi

Inserito il - 16 ottobre 2011 : 08:02:36

Citazione:
vorrei sapere come fare a "scioglire" le cell per estrarre le proteine da far correre per elettrof vertic in condiz denat.

Qualcosa del genere dovrebbe funzionare:
http://www.molecularlab.it/protocolli/protocol.asp?id=11

Citazione:
secondo voi il mio anticorpo pu� riconoscere la prot anche se denaturata?

Se l'anticorpo � indicato come anticorpo per Western blot (guarda sul foglietto che arriva con l'anticorpo o sul sito internet del produttore) c'� una buona probabilit�. Se invece non fosse indicato cos�, prova lo stesso perch� magari potrebbe funzionare! E' impossibile darti una risposta pi� precisa senza sapere esattamente che anticorpo usi.

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Daria85
Utente

678 Messaggi

Inserito il - 16 ottobre 2011 : 11:24:24

io i PBMC li liso normalmente inRIPA Buffer + inibitori delle proteasi , consiste in una semplice lisi in ghiaccio per 30 min, seguita da una centrifugata dopo la quale si tiene il surnatante.

Per l'IG bisogna vedere se l'epitopo che riconosce � lineare o discontinuo, lo puoi vedere tranquillamente analizzando la sequenza FASTA.

baci

PS anchio lavoro su alcuni progetti di SM, ma mi occupo di molecole anti-infiammatorie.