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Microlab
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
 Inserito il - 19 ottobre 2011 : 12:54:32
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Ciao a tutti!
Volevo porvi un quesito...sono ormai mesi che faccio una ligasi tra un frammento portatore di una resistenza ad un antibiotico ed un plasmide. Le cellule crescono su piastre contenenti agar + antibiotico, la pcr delle colonie scelte viene fatta utilizzando degli oligo che amplificano il frammento inserito e risulta positivo, ma l'estrazione plasmidica non estrae nulla.
secondo voi perchè????
Grazie
Microlab
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RM
Nuovo Arrivato
115 Messaggi |
Inserito il - 19 ottobre 2011 : 16:55:51
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Ciao
I primers sono interni, cioè legano entrambi sull'inserto, oppure ne hai uno sull'inserto e l'altro sul vettore? te lo chiedo perchè nel primo caso è abbastanza frequente avere falsi positivi. |
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Microlab
Nuovo Arrivato
2 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2011 : 21:45:19
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Ciao, si i primer sono interni legano entrambi sull'inserto, in ogni caso non si spiegherebbe perchè crescono su terreno con antibiotico.
Grazie
Microlab |
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Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 20 ottobre 2011 : 22:11:08
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Citazione:
ma l'estrazione plasmidica non estrae nulla.
secondo voi perchè????
Scusa non capisco bene cosa intendi per negativa? le cellule non contengono il tuo vettore o semplicemente le cellule contengono il vettore ma la PCR x vedere se dentro c'è l'inserto da esito negativo?
Se fosse il primo caso io proverei a estrarre il vettore senza inserto da una coltura fatta dalla stab (ha
iuno stab?)
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SpemannOrganizer
Utente
Città: Los Angeles
955 Messaggi |
Inserito il - 21 ottobre 2011 : 12:57:57
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| da come ho capito io sembrerebbe con nn riesce a estrarre proprio il plasmide |
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Estrazione plasmidica
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