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Discussione |
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daniela_ruggiero
Nuovo Arrivato
Prov.: Salerno
Città: moio della civitella
2 Messaggi |
 Inserito il - 22 novembre 2006 : 10:53:38
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Ciao a tutti.
Devo fare un saggio ELISA Sandwich per misurare i livelli di una proteina nel plasma umano. Ho un dubbio: per misurare il background di assorbimento di ogni campione di plasma devo devo fare anche un "no-coating", cioè utilizzare lo stesso plasma in un pozzetto in cui non aggiungo l'anticorpo primario, oppure ciò non è necassario? I kit che sto utilizzando non ne parlano e non riesco a trovare informazioni a riguardo. Inoltre ho riflettuto  che alcuni kit in cui sono fornite già le pistre con l'anticorpo primario legato ai pozzetti non prevedono, ovviamente, il no-coating...
Per favore aiutatemi!!!!!!!!!!!! 
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
 Inserito il - 22 novembre 2006 : 18:25:43
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| Solitamente se è un kit che è già pronto all'uso, ti danno tutte le informazioni necessarie, compresi gli eventuali controlli, se non c'è il "no-coating" forse non occorre farlo per quel tipo di dosaggio. |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 23 novembre 2006 : 00:41:08
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| Ad ogni modo fare un controllo in più non fa male. Meglio fare un po' di lavoro in più che poi trovarsi alle strette quando un reviewer te lo chiede in fase di pubblicazione... |
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biomagen
Nuovo Arrivato
Città: Barcellona
19 Messaggi |
Inserito il - 23 novembre 2006 : 09:17:25
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Ciao Cick80,
anche io ho lo stesso problema. Sul protocollo dell'R&D, la casa produttrice di questi kits, non è riportato alcun "no coating", non è nemmeno menzionato. Sono d'accordo anche io che è meglio fare un pò di lavoro in più anziché ritrovarsi poi con un articolo rifiiutato. L'arcano dilemma, però, nasce dal momento in cui i campioni di plasma che disponiamo sono "preziosi" e quindi riuscire a non consumarne molto sarebbe anche questo un goal. Per cui, se è necessario, i "no coating" li faremo ma se non sono "richiesti" meglio. E' possibile che tutti gli articoli che ho letto fino ad ora nessuno ne parla?
Aiutateci
Grazie |
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chick80
Moderatore
Città: Edinburgh
11491 Messaggi |
Inserito il - 23 novembre 2006 : 11:09:51
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Magari potresti farlo solo su un paio di campioni e se lì ti viene negativo puoi assumere che la tecnica funzioni bene anche con gli altri.
Io lo farei almeno in un campione per esperimento, giusto per sicurezza.
Devo però dire che non ho mai usato questi kit commerciali, che magari sono iperaffidabili e quindi non necessitano di questi controlli.... |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 23 novembre 2006 : 15:41:41
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Se un kit non va te ne accorgi sia dagli standards che dai controlli che dai risultati che ti aspetti dai tuoi campioni( perlomeno è così per i pazienti che sai avere una certa patologia e di conseguenza avranno più o meno di una certa sostanza o analita).
Io sinceramente non ricordo di avere mai avuto il no- coating negli ELISA come invece si usa per i RIA. |
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daniela_ruggiero
Nuovo Arrivato
Prov.: Salerno
Città: moio della civitella
2 Messaggi |
Inserito il - 23 novembre 2006 : 17:21:50
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Ciao cin,
grazie per il contributo.
Il problema è che io non faccio diagnostica, e quindi i miei non sono pazienti, ma individui di un'intera popolazione!!!! Perciò non so che valori aspettarmi!!!!
Il mio dubbio sta nel fatto che non so se il backgruond aspecifico possa variare molto tra plasma e plasma, e quindi non so se è sufficiente considerare come background per tutti i pozzetti solo il valore di assorbimento del bianco della curva standard...
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 23 novembre 2006 : 18:35:35
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Penso che il background aspecifico dipenda dal tipo di Kit nel senso che se i due anticorpi ( del sandwich) sono specifici e non cross reagiscono con altri epitopi all'interno del tuo pozzetto si può dire che è un buon kit; è importante inoltre che il lavaggio venga fatto in maniera adeguata ( meglio se con un lavatore di piastre)proprio per portare via tutto ciò che non si è legato e che potrebbe dare problemi.
Non avevo mai pensato che una delle differenze tra un RIA ed un ELISA è che nel primo abbiamo l'NSB ( non specifc bound) poi comunque c'è la curva standard con il suo zero mentre negli ELISA ci sono solo i punti della curva ed i controlli (solitamente uno alto ed uno basso). Un indice di kit che secondo me lascia a desiderare è la mancanza dei controlli. Visto che poi tutti i kit sono fatti così forse non serve avere il no-coating.
Comunque non puoi non provare il kit sui tuoi campioni, sia per vedere la bontà del kit, sia per vedere se cadono all'interno della curva e se sono troppo alti quindi li devi diluire.
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biomolecola
Nuovo Arrivato
Prov.: Napoli
Città: Napoli
40 Messaggi |
Inserito il - 24 novembre 2006 : 17:27:41
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Il no coating non è necessario. Sitratta di ottimi kit. Io ne ho usati parecchi. Il tuo di che marca è?
Se non ti serve fare elisa a scopo diagnostico sei ancora più giustificato nel non farlo!
L'estrema precisione serve in diagnostica, non in ricerca!
Un salutone! |
W la ricerca |
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cin
Utente Junior
Prov.: Padova
Città: Padova
558 Messaggi |
Inserito il - 24 novembre 2006 : 17:44:55
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Citazione:
L'estrema precisione serve in diagnostica, non in ricerca!
Non mi dire queste cose.......io faccio entrambe le cose e penso che in fatto di precisione non si possa pensare di avere due metri e due misure. |
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