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Biovirus
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11 Messaggi |
 Inserito il - 23 novembre 2011 : 14:09:47
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Ciao.
Qualcuno conosce un metodo o una formula matematica per risalire dal numero di copie di cDNA al numero di copie di RNA?
Grazie
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Biovirus
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11 Messaggi |
Inserito il - 24 novembre 2011 : 09:04:11
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Riformulo meglio la domanda:
qualcuno sa se quando io retrotrascrivo RNA in cDNA con primer specifici ad esempio (ma non solo, anche con random esameri) ho un aumento nel numero di copie dell'RNA oppure la stessa quantità di partenza di RNA semplicemente me la ritrovo in cDNA.
Un'atra domanda: l'enzima retro-trascrittasi amplifica solo RNA o anche DNA e cDNA?(cosa utilizza come stampo?)
Grazie |
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coccodrillina
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3 Messaggi |
Inserito il - 30 novembre 2011 : 14:13:41
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Ciao.
Anche a me interesserebbe sapere se la concentrazione iniziale di RNA durante la RT e la concentrazione finale di cDNA corrispondono oppure quest'ultima aumenta. Perchè in real-time vorrei utilizzare cDNA anzichè RNA e vorrei evitare di avere un risultato sfalsato nella quantificazione assoluta. (Come standard utilizzo un plasmide in cui è stato clonato il mio gene di interesse.)
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Biovirus
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11 Messaggi |
Inserito il - 05 dicembre 2011 : 08:51:48
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Anch'io ho bisogno di quest'informazione per la tua stessa applicazione.
In teoria credo sia come dici tu, cioè l'RNA viene semplicemente trasformato in cDNA senza che ci sia un aumento della concentrazione o numero di copie.
Prima di cominciare l'esperimento però vorrei averne conferma, ma sia in bibliografia che nei vari protocolli che ho consultato non viene chiarito. |
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Daria85
Utente
678 Messaggi |
Inserito il - 05 dicembre 2011 : 09:07:57
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| bisognerebbe conoscere la processività effettiva della RT...io sinceram non so se effettua una singola retrotrascrizione per filamento o più di una O.O |
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Biovirus
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11 Messaggi |
Inserito il - 05 dicembre 2011 : 09:49:59
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| In un documento ho trovato che l'enzima RT ha una processività intermedia...ma non so come interpretare questa informazione.. |
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pokypsi
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20 Messaggi |
Inserito il - 20 dicembre 2011 : 13:25:34
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| Da un RNA si retrotrascrive un cDNA, quindi si puó approssimare che se retrotracrivi 1ug di RNA hai 1ug di cDNA. Di solito é un pó di meno perché alcuno si degrada peró io ho sempre fatto questa approssimazione e non ho mai avuto grossi problemi, ovviamente dipende dall´efficienza della retrotrascrizione. Cmq col nanodrop si puó misurare anche il cDNA, magari puó essere utile :D |
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Biovirus
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11 Messaggi |
Inserito il - 21 dicembre 2011 : 13:40:43
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Io uso la Superscript III dell'Invitrogen che dovrebbe essere una delle migliori...quindi vado abbastanza sul sicuro.
Grazie mille cmq |
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Calcolo num copie RNA-cDNA
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