Scongelamento e ricongelamento campioni

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Kuradia
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13 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2011 : 14:42:49

Salve a tutti, qualcuno sa dirmi (e spiegarmi anche il motivo) se � possibili scongelare e ricongelare lisati da utilizzare per il western blot? Da quel che sento dire qualcuno lo fa ma ricongela i campioni solo se gli si aggiunge il sample buffer, qualcun altro dice che non si deve fare perch� le proteine perdono la loro struttura tridimensionale (ma in ogni caso non si denaturano comunque durante la corsa su gel??)e qualcun altro ancora invece lo fa tranquillamente (ricongelandolo e riutilizzandolo al massimo 3 volte)

Sapete dirmi qual � il comportamento giusto e perch�? Grazie in anticipo

knodel
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24 Messaggi

Inserito il - 15 dicembre 2011 : 20:44:32

Normalmente si fa... Bisogna farlo bene.... Ossia scongelandoli in ghiaccio e riscongelando una volta finito.

Aggiungere sample mi sembra una cosa un po' inutile....forse intendi il buffer d estrazione...in questo caso sarebbe utile perch� aggiungi inibitori delle proteasi freschi.......ma devi poi tener conto d quanto hai aggiunto per capire quanto hai diluito il tuo campione (che se nn e' concentrato e' un casino)

La storia della conformazione non l ho capita..... Se le metti a -80 le proteine congelano.... Che tu le abbia appena estratte o appena scongelate si comportano nella stessa maniera.... Quello che non gli fa bene sn gli sbalzi termici e le proteasi che le degradano

pokypsi
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20 Messaggi

Inserito il - 20 dicembre 2011 : 13:20:13

Concordo si pu� fare senza troppi danni. Io cmq di solito mi faccio delle aliquote e scongelo solo quella che mi serve

Kuradia
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13 Messaggi

Inserito il - 21 dicembre 2011 : 11:38:44

s� anche noi facciamo le aliquote, ma non troppo piccole quindi avanza sempre un bel po' di campione...@knodel, no no io mi riferivo proprio al sample buffer, chi lo fa dice che stabilizza le proteine, boh...vabb� grazie a tutti

adelaide74
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2 Messaggi

Inserito il - 29 dicembre 2011 : 21:24:55

meglio aliquotare....scongelare e ricongelare per le proteine non va molto bene...