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marok
Utente Junior
150 Messaggi |
 Inserito il - 24 gennaio 2012 : 13:19:11
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Ciao a tutti, devo eseguire una quantificazione proteica su un surnatante nel quale c'è anche dell'emoglobina, per cui è già rosato di suo.
Ho sempre usato il bio-rad protein assay su composti incolori, credete che proteine "colorate" come l'emoglobina possano inficiare i risultati?
Devo usare particolari accorgimenti?
Grazie!
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AleXo
Moderatore
Prov.: Estero
Città: San Francisco, California
1550 Messaggi |
Inserito il - 24 gennaio 2012 : 18:41:54
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| devi misurare solo l'emoglobina o tutto? |
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Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 24 gennaio 2012 : 22:14:23
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| guarda io di solito quando dosavo i miei campioni mettevo tipo 0.01mL in 1mL (0.8mL H2O e 0.2mL reattivo biorad) un fattore di diluizione del genere non dovrebbe influenzare la reazione comunque nel bugiardino ti vengono date tutte le informazioni sulle interferenze |
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marok
Utente Junior
150 Messaggi |
Inserito il - 25 gennaio 2012 : 12:08:52
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Devo misurare le proteine totali.
Sicuramente farò delle diluizioni, perchè altrimenti non sto dentro la curva, ma so già che il composto sarà anche se di poco, già colorato di per se.
Ho cercato anche su internet, ma trovo solo i composti compatibili e non quelli interferenti, il mio dubbio era se usare il kit normale oppure il DC o RC/DC, ma non uso ne detergenti, ne agenti riducenti... non so il ferro dell'emoglobina se può darmi noia, ma non riesco a trovare lettertura da nessuna parte. |
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marok
Utente Junior
150 Messaggi |
Inserito il - 25 gennaio 2012 : 18:09:05
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In merito non ho molta esperienza: sarebbe possibile fare un calcolo sottraendo all'assorbanza del campione diluito con il reattivo, quella del campione diluito senza reattivo? o viene fuori una boiata? (usando due bianchi diversi, uno H2O e l'altro H2O + reattivo)
(magari sono flippe mentali e funziona benissimo normalmente, ma visto che devo comprare i reagenti nuovi vorrei avere un piano B per non buttar via soldi  ) |
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Martin.diagnostica
Utente Attivo
1582 Messaggi |
Inserito il - 25 gennaio 2012 : 19:28:16
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Citazione:
Messaggio inserito da marok
In merito non ho molta esperienza: sarebbe possibile fare un calcolo sottraendo all'assorbanza del campione diluito con il reattivo, quella del campione diluito senza reattivo? o viene fuori una boiata? (usando due bianchi diversi, uno H2O e l'altro H2O + reattivo)
non sta ne in cielo e ne in terra
Citazione:
(magari sono flippe mentali e funziona benissimo normalmente, ma visto che devo comprare i reagenti nuovi vorrei avere un piano B per non buttar via soldi )
nessuno ti presta un 1 mL per saggiare per es 5 diluizioni del tuo campione? |
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marok
Utente Junior
150 Messaggi |
Inserito il - 26 gennaio 2012 : 10:41:36
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Purtroppo no.
Va be proverò e poi magari vi dirò se funziona lo stesso, in fondo l'assorbimento massimo dell'Hb è 660 e forse a 595 non inciderà molto...forse...
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marok
Utente Junior
150 Messaggi |
Inserito il - 23 febbraio 2012 : 20:18:26
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Buone nuove.
Provato e funge alla grande. Per saggiare la bontà della quantificazione ho usato anche emoglobina umana liofila pura ed è uno spettacolo!
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Discussione |
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Biorad protein assey e proteine colorate
Didattica e Relazioni
